中文会议： 中国菌物学会第五届会员代表大会暨2011年学术年会论文集

会议日期： 2011-08-15

会议地点： 广州

主办单位： 中国菌物学会,广州市科协,广东省微生物学会&广东省食用菌行业协会

出版方 ： 中国菌物学会

作　　者： ; ; ; ; ; ; ;

机构地区： 华南农业大学食品学院

出　　处： 《中国菌物学会第五届会员代表大会暨2011年学术年会》

摘　　要： 　　白藜芦醇(RESVERATORL,简称RES)是一种重要的植物抗毒素,具有抗癌、抗炎症、心血管保护等多种保健功能.然而,在白藜芦醇在天然植物体内的含量非常低,用传统的提取方法白藜芦醇成本很高,因此采用基因工程手段进行异源表达获取白藜芦醇是研究的热点.本研究利用PCR和RT-PCR技术从花生粤油45中克隆出白藜芦醇合酶基因的DNA和CDNA序列,并运用生物信息学的方法对其进行了序列分析；构建了含金针菇内源GPD启动子和白藜芦醇合酶基因(RS)基因的真核表达载体,并采用PEG介导法将该载体遗传转化金针菇原生质体.研究结果表明：(1)克隆得到的白藜芦醇合酶基因的全长DNA序列和全长CDNA序列,分别为1498BP和1251BP.该CDNA序列具有完整的开放性阅读框,编码389个氨基酸的多肽,相对分子量为42.8 KD,等电点为5.70,含有2个内含子.该白藜芦醇合酶氨基酸368～378位点上存在芪合酶家族的特征位点GVLFGFGPGLT.(2)构建的金针菇真核表达载体PGFVS-RS含金针菇内源性启动子GPD-FVS 和白黎如醇合酶基因RS.(3)金针菇原生质体制备与再生体系为：液体培养5D的金针菇菌丝,以0.6 MOL/L KCL作为稳渗剂,加入1.5％溶壁酶,在30℃下酶解金针菇菌丝3H时,分离得到的原生质体效果最佳,原生质体产量在2×107～1 × 108个/ML之间；采用预培养法,再生效果较好,在含有0.6 MOL/L甘露醇的MYG培养基中,原生质体再生率达1.28％. (4)采用PEG介导法,将真核表达载体PGFVS-RS和PGFVS-HPH共转化金针菇菌丝原生质体,经PCR鉴定及RT-PCR验证,有10株转化子的基因组DNA中整合了外源RS基因,其中2株转化子在MRNA水平上转录表达RS基因.

关 键 词： 白藜芦醇 基因克隆 金针菇 异源表达

分 类 号： [S43 TQ9]

领　　域： [农业科学] [农业科学] [化学工程]