中文会议： 中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会论文集

会议日期： 2013-11-01

会议地点： 郑州

主办单位： 中国畜牧兽医学会

作　　者： ; ; ; ; ; ; ; ; ;

机构地区： 华南农业大学兽医学院

出　　处： 《中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会》

摘　　要： 　　酰基甘油酯酶(MONOACYLGLYCEROL LIPASE,MAGL)对机体酯代谢具有重要的作用,是研发和筛选抗球虫药物的重要靶标.本研究利用生物信息学和比较基因组学技术注释拼接得到柔嫩艾美耳球虫(E.TEN-ELLA)酰基甘油酯酶(ETMAGL)的基因序列,以预测的序列设计特异性引物,以E.TENELLA第二代裂殖子总RNA为模板,用RT：PCR的方法扩增出ETMAGL全长序列；通过在线软件对其进行生物信息学分析,结果显示,ETMAGL全长ORF为1752BP,编码583个氨基酸的多肽片段,与其他物种MAGL的氨基酸序列相似性为L7％：37％；无信号肽,无跨膜结构域；三级结构预测显示ETMAGL与HMAGL(LA8Q)结构最为相似,预测的ETMAGL单体由6个α螺旋,7个β折叠及13个无规则卷曲组成.构建PCOLD：43A：ETMAGL重组质粒,获得可溶性蛋白,利用DTNB显色法来分析ETMAGL的生化特性,测定温度、PH对酶活性的影响,结果显示ETMAGL的最佳反应温度为25℃,最佳PH为7.5.根据筛选的最佳条件进行酶动力学及抑制动力学分析,结果显示ETMAGL对2：ATG的KM值为6.7±0.028 μM,反应VMAX=61.2±1.0758 MMOL/MIN,与其他物种具有一定差异.化合物JZL 184对ETMAGL具有较强的抑制效果,IC50=8.021±0.02UM.本研究首次注释、克隆了柔嫩艾美耳球虫酰基甘油酯酶的基因,并进行了重组表达,系统分析了重组蛋白的体外活性及相关生化特征,建立了一个以ETMAGL为靶标的抑制剂体外筛选模型,并发现了JZL 184对ET-MAGL具有一定的抑制活性,为新型抗球虫药物的研发和潜在靶标的筛选奠定了理论基础.

关 键 词： 柔嫩艾美耳球虫 酰基甘油酯酶 基因表达 功能药靶

分 类 号： [S85 S83]

领　　域： [农业科学] [农业科学] [农业科学] [农业科学]