中文会议： 中国畜牧兽医学会禽病分会第十三次学术研讨会

会议日期： 2006-10-01

会议地点： 长沙

主办单位： 中国畜牧兽医学会

作　　者： ; ; ; ; ; ;

机构地区： 华南农业大学动物科学学院

出　　处： 《中国畜牧兽医学会禽病分会第十三次学术研讨会》

摘　　要： 本研究利用RT-PCR技术扩增了H5N1亚型禽流感病毒A株的NS1基因,ORF的长度为678BP.并成功构建了重组表达载体PBCX-NS1,将其转化BL21(DE3),用终浓度1MM/L的IPTG诱导表达,经12％的SDS-PAGE分析表明,在4H时表达量最大达48.25％.融合蛋白的分子量约为60KD,且80％以上以可溶形式表达,采用非变性方法对目的蛋白纯化,最终得到纯度约为93.44％的NS1蛋白.将纯化的NS1蛋白作为抗原,建立ELISA方法.重组NS1蛋白只与AIV感染的血清反应,不与灭活病毒免疫血清反应;用NS1蛋白检测直接攻毒与间接感染所获得血清,二者结果差异不显著,说明了本试验方法的敏感性.纯化的灭活病毒能消除尿囊液中少量NS1蛋白的影响,能进一步提高特异性.H5-NS1蛋白和H9NS1蛋白分别与H5N1、H9N2阳性血清反应差异不显著.本试验的建立的NS1-DIVA-ELISA方法不仅能区分感染禽群和免疫禽群,还能区分先免疫后感染禽群,虽不能区分亚型,但具有A型特异性,为生产上提供了一种快速、特异、敏感的诊断方法,也为禽流感的早期诊断和监控起到很好的作用.

关 键 词： 禽流感病毒 亚型 蛋白 检测 非结构蛋白

领　　域： [农业科学]