中文会议： 中国实验动物学会水生实验动物专委会第三届学术研讨会论文集

会议日期： 2008-11-12

会议地点： 珠海

主办单位： 中国实验动物学会

作　　者： ; ; ; ; ;

机构地区： 中国水产科学研究院珠江水产研究所

出　　处： 《中国实验动物学会水生实验动物专委会第三届学术研讨会》

摘　　要： 目的:卵黄蛋白原基因(VG)在鱼类生殖过程中有着重要功能，由于VG受雌激素类物质的诱导，鱼类VG作为一种有效的生物标志物已被广泛应用于环境污染物的评价。本研究通过对剑尾鱼卵黄蛋白原基因片段的克隆和表达，建立剑尾鱼卵黄蛋白原蛋白检测方法。为剑尾鱼生殖生理及环境应用等不同领域研究打下重要基础。 方法:利用逆转录PCR(RT-PCR)，末端快速扩增(RACE)等方法，从17 B雌二醇诱导的剑尾鱼肝脏中提取RNA并扩增出卵黄蛋白原目的基因，而后克隆到PMD18-T载体中，鉴定后进行序列测定并拼接全长。在对该序列所编码氨基酸可能抗原位点分析的基础上，选取771BP的核心序列，进行PCR改造构建原核表达载体，预期得到258个氨基酸的表达蛋白。以重组蛋白免疫新西兰大白兔，获得抗血清。雌激素(17 β-雌二醇)对剑尾鱼诱导后，用重组蛋白抗血清作一抗，进行WESTERN-BLOT分析。 结果:首次克隆到剑尾鱼卵黄蛋白原A全长CDNA序列，VGA CDNA全长5159 BP，5'和3'非编码区分别为16 BP和85 BP，含有一个5058 BP的开放阅读框，编码1685个氨基酸，推测其编码氨基酸分子量大小为187.2 KD。所得序列具有VITELLOGENIN结构域、VWFD结构域和多聚丝氨酸结构域。构建了VGA核心片段原核表达质粒，经诱导表达后得到29KDA的表达蛋白。WESTERNBLOT分析表明，该重组蛋白抗血清可应用于剑尾鱼卵黄蛋白原的检测。 结论:本研究首次克隆到剑尾鱼卵黄蛋白原A基因全长CDNA序列，对其部分序列进行表达，建立了剑尾鱼VGA的检测方法。

关 键 词： 剑尾鱼 基因 卵黄蛋白原基因 原核表达 蛋白检测 环境污染物评价

分 类 号： [S]

领　　域： [农业科学]