中文会议： 中国畜牧兽医学会2004年学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集(下册)

会议日期： 2004-09-11

会议地点： 北京

主办单位： 中国畜牧兽医学会

作　　者： ; ; ; ; ; ; (于康震）;

机构地区： 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室

出　　处： 《中国畜牧兽医学会2004年学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会》

摘　　要： 不同物种间细胞在蛋白翻译过程中具有密码子使用的偏嗜性,鸡与A型流感病毒保护性免疫原HA蛋白氨基酸密码子使用频率存在着明显差异.为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR及限制酶切法构建了密码子优化的A/GOOSE/GUANGDONG/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]的HA基因(OPTIHA),并将其插入CMV启动子表达载体PCI构建了H5亚型DNA疫苗质粒PCIOPTIHA,将含有GD/1/96(H5N1)野生型HA基因的质粒PCIHA和PCIOPTIHA分别转染293T细胞,间接免疫荧光检测转染后24-48小时293T细胞中瞬时表达的HA抗原蛋白;WESTERN-BLOT证实上述2种表达质粒均可正确表达H5亚型HA抗原蛋白,结果表明密码子优化的基因OPTIHA体外瞬时表达水平显著高于野生型HA基因.这一结果为进一步开展SPF鸡免疫保护效果的比较研究奠定了基础.

关 键 词： 基因 密码子优化 重叠延伸 间接免疫荧光 检测 禽流感病毒 疫苗 体外表达

领　　域： [农业科学]