中文会议： 中国畜牧兽医学会生物制品学分会、中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会暨第三届中国兽药大会论文集

会议日期： 2010-09-01

会议地点： 长沙

主办单位： 中国畜牧兽医学会,中国微生物学会,中国动物保健品协会

作　　者： ; ; ; ; ; ;

机构地区： 华南农业大学兽医学院

出　　处： 《中国畜牧兽医学会生物制品学分会、中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会暨第三届中国兽药大会》

摘　　要： 本研究基于RIMM(编码16S RRNA-加工蛋白)基因建立了一种新型的可视化环等温扩增(LOOP-MEDIATEDISOTHERMAL AMPLIFICATION，LAMP)方法，用于快速检测结核分枝杆菌及牛分枝杆菌。这种新型可视化LAMP方法在反应体系中加入了钙黄绿素指示剂与氯化锰，64°C反应1H即可通过目测产物颜色而判断结果。反应模板中不含靶DNA的LAMP产物仍旧保持橙色，而具有靶DNA的LAMP产物则变为绿色。使用该方法对84株结核分枝杆菌及3株牛分枝杆菌进行检测均显示阳性结果，而在51株非结核分枝杆菌及9种其它常见菌株中均显示阴性结果，准确率和特异性均为100[％]。敏感性试验显示，该方法扩增基因组DNA的极限为1PG。扩增产物电泳图谱及HHAⅠ酶切分析验证了LAMP产物的特异性。这种新型可视化LAMP不但可以对细菌培养物进行检测，而且还能对痰液、血液、胸水等临床样品进行检测。研究表明，可视化LAMP具有快速、特异、敏感、无需昂贵仪器及结果可视化等优点，在临床检测结核分枝杆菌及牛分枝杆菌中的具有巨大的潜力。

分 类 号： [TP3 S85]

领　　域： [自动化与计算机技术] [农业科学] [农业科学]