中文会议： 第十二届中国科协年会论文集

会议日期： 2010-11-01

会议地点： 福州

主办单位： 中国科协

作　　者： ; ;

机构地区： 广州医学院公共卫生学院

出　　处： 《第十二届中国科协年会》

摘　　要： 目的:获取大量具有良好生物活性的早孕因子（EPF）重组变应原。方法：HELA 细胞中提取总RNA，利用 RNASE-FREE DNASEI处理总RNA，采用RT-PCR的方法扩增EPF基因，将扩增产物和载体PGEX-5X-1进行双酶切后回收,连接载体和目的片段,获得重组质粒.将重组质粒转化大肠杆菌BL21。在大肠杆菌BL21中通过IPTG进行诱导表达,然后用谷胱甘肽-琼脂糖球珠亲和层析纯化得到纯的EPF蛋白。用SDS-PAGE鉴定其纯度，用玫瑰花环抑制试验（RIT）检测生物学活性。结果：以HELA细胞总RNA为模板，采用RT-PCR的方法有效扩增出EPF基因。EPF基因以正确的阅读框架插入表达载体PGEX-5X-1，经IPTG诱导后高效表达EPF蛋白。RIT显示目的蛋白具有良好的EPF生物学特性。结论：成功构建了EPF的原核表达载体，并纯化了具有生物学特性的重组蛋白，为进一步开展EPF蛋白的相关研究奠定了基础。

关 键 词： 早孕因子 克隆表达 生物学特性 重组蛋白

领　　域： [自然科学总论]