中文会议： 中国畜牧兽医学会兽医药理学毒理学分会中国毒理学分会兽医毒理学专业委员会联合学术会议论文集

会议日期： 2003-10-15

会议地点： 南京

主办单位： 中国畜牧兽医学会

作　　者： ; ; ; ;

机构地区： 吉林农业大学动物科学技术学院

出　　处： 《中国畜牧兽医学会兽医药理学毒理学分会中国毒理学分会兽医毒理学专业委员会联合学术会议》

摘　　要： AcrAB蛋白是大肠杆菌最主要的主动外排系统，可完成对多种药物的外输，其中连接蛋白AcrA连接内膜转运子AcrB和外膜孔道TolC。从大肠杆菌AcrA的编码序列中设计引物，以大肠杆菌基因组为模板，扩增出AcrA基因中约691bp的cDNA片段，将所得片段与pMD-18T载体连接，转化到DH5。大肠杆菌中，成功地筛选到阳性克隆，其质粒测序结果与文献报道一致。从阳性克隆中提取质粒，经HindⅢ和BamH Ⅰ酶解,回收691bp的目的片段，定向克隆到Pet-28a表达载体中，提取质粒，再次转化到BL21(DE3)中，成功地筛选出阳性克隆。经IPTG诱导阳性菌，通过SDS-PAGE检测出AcrA部分基因的表达。用侧带法纯化AcrA部分基因的原核表达产物，将纯化的表达蛋白与弗氏佐剂乳化后(目的蛋白终浓度为1mg/mL)，作为免疫原按Iml/只，次的剂量，免疫獭兔三次，每次间隔14d。首免采取多点皮下注射，加强免疫采取多点肌肉注射。加强免疫后每隔7d耳静脉采血一次，用ELASA直至检出理想的抗体效价。AcrA抗体的成功制各为采用Western-blotting法检测大肠杆菌AcrAB外输泵的表达水平奠定了基础。

关 键 词： 大肠杆菌 基因克隆 原核表达 蛋白抗体 编码序列

分 类 号： [S8]

领　　域： [农业科学]