中文会议： 中国畜牧兽医学会禽病学分会第12次学术研讨会论文集

会议日期： 2004-09-01

会议地点： 贵阳

主办单位： 中国畜牧兽医学会

作　　者： ; ; ; ; ; ; (于康震）;

机构地区： 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室

出　　处： 《中国畜牧兽医学会禽病学分会第12次学术研讨会》

摘　　要： 免疫原基因的密码子优化是提高DNA疫苗免疫保护效果的有效策略.不同物种间细胞在蛋白翻译过程中具有密码子使用的偏嗜性,鸡与A型流感病毒保护性免疫原HA蛋白氨基酸密码子使用频率存在着明显差异.为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR及限制酶切法构建了密码子优化的A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)<'[GD/1/96(H5N1)]>的HA基因(optiHA),并将其插入CMV启动子表达载体pCI构建了H5亚型DNA疫苗质粒pCIopiHA,将含有GD/1/96(H5N1)野生型HA基因的质料pCIHA和pCIoptiHA分别转染293T细胞,间接免疫荧光检测转染后24-48小时293T细胞中瞬时表达的HA抗原蛋白;Western-blot证实上述2种表达质粒均可正确表达H5亚型HA抗原蛋白,结果表明密码子优化的HA基因体外瞬时表达水平显著高于野生型HA基因.这一结果为进一步开展SPF鸡免疫保护效果的比较研究奠定了基础.

关 键 词： 基因 密码子优化 重叠延伸 间接免疫荧光 检测 禽流感病毒 疫苗 疫苗免疫保护

领　　域： [农业科学]