中文会议： 第二届中国动物学会比较内分泌学分会、发育生物学分会联合学术年会论文集

会议日期： 2005-11-08

会议地点： 杭州

主办单位： 中国动物学会

作　　者： ; ; ; ; ;

机构地区： 中山大学生命科学学院水生经济动物研究所

出　　处： 《第二届中国动物学会比较内分泌学分会、发育生物学分会联合学术年会》

摘　　要： 白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)是一种具有广泛生物学活性的多肽.IL-1β前体蛋白并没有活性,在经过IL-1β转化酶切割后成为具有生理活性的成熟肽,在哺乳动物中除可引起炎症反应、激活T细胞以外,亦可影响下丘脑、垂体、性腺及子宫等的功能,是免疫系统与神经内分泌系统间的重要信使分子.在进行鱼类及哺乳动物IL-1β基因序列的同源性比对,并根据保守区设计简并引物后,以斜带石斑鱼(Epinepheluscoioides)脾脏反转录产物作为模板,利用PCR方法获得斜带石斑鱼IL-1β基因cDNA片段;再利用RACE技术,获得IL-1βcDNA的3'末端和5'末端.斜带石斑鱼IL-1βcDNA基因序列的全长为1364bp,3'非编码区为120bp,5'非编码区为480bp,开放读码框为765bp,编码255个氨基酸,分子量大约为28.7kD,其中成熟肽由176个氨基酸组成,分子量约为19.7kD.与其他鱼类及哺乳动物IL-1β氨基酸序列同源性分析表明,斜带石斑鱼IL-1β与其他动物IL-1β氨基酸序列有较高的相似性,同时亦含有白细胞介素家族的标识序列.将编码IL-1β成熟肽的基因序列亚克隆至原核表达载体pET-22b(+)中,构建IL-1β重组蛋白原核表达质粒pIL1-ET22b(+)并经测序验证.将该重组质粒转化大肠杆菌BL21后,进行诱导表达,并优化培养温度、诱导时间及IPTG浓度.在30℃,0.5mMIPTG诱导4hr后,重组菌株表达可溶可溶性目的蛋白,约占菌体蛋白70％.利用目的蛋白的融合组氨酸标签与镍层析柱特异结合的特性进行蛋白分离纯化,获得较纯的重组表达蛋白.斜带石斑鱼IL-1β重组蛋白的表达纯化,为后续的生物功能研究以及抗体的制备提供基础。

关 键 词： 斜带石斑鱼 白细胞介素 原核表达 纯化 序列 免疫系统

领　　域： [农业科学]