中文会议： 第六届中南地区实验动物科技交流会论文汇编

会议日期： 2006-10-01

会议地点： 郑州

主办单位： 中国实验动物学会

作　　者： ; ; ;

机构地区： 南方医科大学

出　　处： 《第六届中南地区实验动物科技交流会》

摘　　要： 目的:利用基因工程技术在大肠杆菌中表达人生长分化因子-5(human growth and differentiation factor 5,hGDF-5)成熟肽.方法:根据Genbank中hGDF-5的序列化学合成两条引物,从人胎儿软骨组织提取总RNA,通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)得到hGDF-5完整成熟肽基因.将所得基因片段插入表达载体pET22b(+),提取重组质粒,酶切鉴定并测序,转化大肠杆菌BL-21进行IPTG诱导表达.结果:DNA琼脂糖凝胶电泳显示:RT-PCR产物为一长约350bp的带,阳性克隆质粒经双酶切可切出约350bp的片段.DNA测序表明与Genbank中的序列完全一致.诱导表达后SDS-PAGE电泳显示在14KD处有一明显的外源蛋白表达条带.结论:通过反转录聚合酶链式反应从人胎儿软骨组织中成功克隆出人GDF-5完整成熟肽基因,基因序列完全正确,并在大肠杆菌中得到高效表达.

关 键 词： 生长分化因子 基因表达 成熟肽 基因克隆

领　　域： [生物学]