中文会议： 第三届中国畜牧科技论坛论文集

会议日期： 2007-10-26

会议地点： 重庆

主办单位： 中国农学会

作　　者： ; ; ;

机构地区： 华中农业大学动物科学技术学院农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室

出　　处： 《第三届中国畜牧科技论坛》

摘　　要： [目的]应用RNA干扰技术设计构建针对猪肌醇磷酸酶SKIP的小干扰RNA,并观察转染猪肾IBRS-2细胞株后的干扰效果。 [方法]利用人类SKIP基因序列和猪的EST数据库设计引物克隆猪SKIP基因编码区序列,针对其设计有短发夹结构的3条mRNA序列,经退火成互补双链,克隆到载体中构建3个重组质粒,脂质体法转染质粒至IBRS-2细胞株后,半定量PCR检测SKIP mRNA的水平变化;细胞计数法绘制细胞生长柱状图。 [结果]单酶切和测序结果证明SKIP-小干扰RNA真核表达载体构建成功,其转染后的IBRS-2细胞SKIP基因表达水平均明显受到抑制,且在添加了胰岛素的培养基中细胞生长速度均明显高于阴性、空白对照组。 [结论]猪肌醇磷酸酶SKIP靶向RNA干扰重组质粒构建成功,该载体能有效抑制猪肾IBRS-2细胞株SKIP基因表达,并能促进胰岛素信号介导的细胞增殖。

关 键 词： 猪 肌醇磷酸酶 干扰 细胞增殖

领　　域： [农业科学]