中文会议： 中国畜牧兽医学会2008年学术年会暨第六届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集

会议日期： 2008-11-14

会议地点： 广州

主办单位： 中国畜牧兽医学会

出版方 ： 中国畜牧兽医学会（Chinese Association of Animal Science and Veterinary Medicine）

作　　者： ; ; ; ; ; ; ;

机构地区： 华南农业大学兽医学院

出　　处： 《中国畜牧兽医学会2008年学术年会暨第六届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会》

摘　　要： 根据GenBank上鸡α-、β-、γ-干扰素(ChIFN-α,-β,-γ)基因的序列,在保守区设计并合成各自特异引物,并以鸡3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)为内参,采用SYBR GreenI染料建立实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测方法. 首先将IFN-α,-β,-γ,克隆至pGEM-T载体上,以各阳性质粒作为标准品,构建标准曲线,并进行了熔解曲线分析。结果表明,鸡IFN-α,-β,-γ和GAPDH的Ct值与标准品稀释度在1×102～1×103拷贝/μL范围,分别呈良好的线性关系,r2均大于0.99.熔解曲线分析结果表明产物为特异的单峰,检测周期从RNA提取到荧光定量PCR结束只需4h.本试验建立的鸡IFN-α,-β,-γ基因实时荧光定量PCR法灵敏度高、特异性强、检测周期短,为在mRNA水平对鸡IFN的定量分析奠定了基础.

关 键 词： 干扰素 基因序列 磷酸甘油脱氢酶 荧光定量 特异引物

领　　域： [农业科学]