导　　师： 李飞

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 南京农业大学

摘　　要： 乙酰胆碱酯酶(acetylcholinestrase, AChE, EC3.1.1.7)是神经冲动传导中的一种关键酶,是有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的作用靶标。其主要存在于胆碱能神经末梢的突触间隙,尤其是运动神经终端突触后膜的皱褶中聚集较多。其经典功能是水解胆碱能神经突触处的神经递质乙酰胆碱(ACh)而保持神经突触传导的正常进行。除此之外,AChE还具有诱导轴突、突触的形成和分化,参与细胞迁移和相互作用、细胞粘附和凋亡,促进造血细胞形成和淀粉样蛋白聚集等非经典功能。目前,已在许多昆虫中克隆发现两个乙酰胆碱酯酶基因。在大多数农业害虫中,acel编码的乙酰胆碱酯酶被认为是杀虫剂的主要作用靶标。而在双翅目的部分昆虫中,只存在ace2基因,分析认为ace1在进化中丢失,其功能被ace2取代。 RNA干扰(RNA interference, RNAi)是外源或者细胞内源性产生的一些短片段的双链RNA,在生物体内诱导靶基因mRNA的特异性降解来阻断体内特定基因的表达,产生相应功能的缺失。大量实验证明,RNAi现象广泛存在于生物界中,是生物抵御病毒侵染和阻断转座子的古老防御机制之一。随着研究的不断深入,RNAi的机制正在被逐步阐明,而同时作为功能基因组和基因治疗研究中的有效工具,RNAi也越来越为人们所重视。 本文通过RNA干扰技术沉默小菜蛾的两个乙酰胆碱酯酶基因表达,分析其基因功能并研究RNA干扰技术在害虫防治中的作用。 1.通过显微注射荧光标记的siRNA,将siRNA导入二龄小菜蛾腹背板内。24小时后荧光显微观察发现,siRNA可以穿过小菜蛾脑血屏障到达头部,证实siRNA可以进入小菜蛾的中枢神经系统。同时,与对照相比注射siRNAs后不同时间的试虫死亡率明显上升,表明RNA干扰具有一定的效果。 2.定量结果显示,si Pxace-1处理72小时后的ace1mRNA表达量被下调90%以上,而si Pxace-2处理后的ace2mRNA表达量�

关 键 词： 乙酰胆碱酯酶 干扰 小菜蛾 基因功能

领　　域： [农业科学] [农业科学]