导　　师： 徐春厚

学科专业： I0502

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 广东海洋大学

摘　　要： 本文在筛选出鼠李糖乳杆菌l3-22(lrl3-22)株的基础上，对其培养条件、活性物质、代谢产物的抑菌活性、细胞破碎方法及小鼠免疫功能进行了研究，为该菌微生态制剂的研制开发奠定基础。用牛津杯双层平板定量扩散法、酸度计测培养物ph值法及菌体干重法，对9种13株乳酸菌抑菌活性、抑菌范围、产酸能力及生长速度进行测定；用紫外线照射进行诱变，筛选正向突变菌株。采用测定lrl3-22株培养物的生物量及酸度的方法，对培养基的成分和起始ph值、培养温度、时间、方式及接种量进行优化，并绘制发酵增殖曲线。用牛津杯双层平板定量扩散法对lrl3-22株代谢产物进行体外抑菌试验。通过测定破碎液的a<,600>、a<,280>、a<,260>nm值来反映细胞的破碎程度和胞内蛋白及核酸物质的释放情况来比较超声波破碎法、反复冻融法及高速匀浆法的细胞破碎效果及优缺点。用最小二乘法绘制标准曲线得出lrl3-22株培养物的乳酸和肽聚糖产量；用试管稀释法测出lrl3-22株代谢产物的最小抑菌稀释度(mic)和最小杀菌稀释度(mbc)。 用健康小鼠80只作为试验动物，对照组为灭菌水。试验1组为自制发酵培养基，37℃培养48h；试验2组为lrl3-22株37℃、48h培养物，活菌数为4.19×10<'8>个／ml；试验3组为100℃灭活30min的lrl3-22株培养物。所有试验小鼠均采用经口接种，0.5ml／只／d，连续13d。通过测定小鼠巨噬细胞的吞噬活性和t淋巴细胞数量及抗体、血清溶血素、器官指数的变化，研究lrl3-22株培养物对小鼠免疫功能的影响。试验得出以下结果： 1.从9种13株乳酸菌中筛选出一株抑菌活性高、抑菌范围广、产酸能力强及生长速度快的乳酸菌，即鼠李糖乳杆菌l3株。通过紫外线照射其诱变，最终获得一株抑菌活性比出发菌提高11.74％，且活性稳定的lrl3-22株。 2.lrl3-22株发酵培养基的优化组合是：14％麦芽汁+3％豆饼汁(1:5)，添加适量的复合无机盐成分；优化的培养条件是：培养基ph自然，26～37℃静止培养48h，接种量2％；发酵增殖曲线呈近“s”形，生物量与产酸量正相关，培养36h时，生物量达最大值1.409；36h时，ph值最低3.79。 3.超声波破碎法的最佳功率是500w，lo～30min的破碎效果没有明显变化；反复冻融法的最佳次数是5次；高速匀浆法的最佳量程为8×2800；以反复冻融法简单易行，效果也比较理想。 4.lrl3-22株代谢产物有较强的抑菌活性。该活性热稳定性好，能耐受100c<’。>的温度，不受过氧化氢酶、蛋白酶k、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的影响；但受ph值的影响较大，随着ph值的升高抑菌活性逐渐降低，在弱酸、中性和碱性条件下将失去抑菌活性。 5.lrl3-22株培养物的乳酸产量为0.159g／ml，肽聚糖含量为0.01mg／ml,葡萄糖胺含量为0.0003 mg／ml；经破碎后的lrl3-22株培养物的乳酸产量为0.159g／ml，肽聚糖含量为0.51 mg／ml，葡萄糖胺含量为0.0076 mg／ml；lrl3-22株培养48h，其培养物的mic为0.0625 mg／ml，mbc为0.125 mg／ml；培养72h，mic为0.03125 mg／ml，mbc为0.0625 mg／ml。 6.lrl3-22株培养物能激活小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性，明显促进其吞噬作用；可使t淋巴细胞数量比对照组多4.28％，抗体积数比对照组多45.1％，并能提高小鼠血清igm水平及胸腺指数和脾脏指数。 本研究筛选出了一株有益乳杆菌，即鼠李糖乳杆菌l3-22株，并优化出了培养基组分和培养条件。该菌株产酸能力强，生长速度快，可提高小鼠免疫功能，其代谢产物抑菌活性强、范围广、性质稳定，是理想的益生素生产菌株。

关 键 词： 鼠李糖乳杆菌 乳酸菌培养 发酵培养基 抑菌活性 免疫功能 饲料微生物学

分 类 号： [S816.3]

领　　域： [农业科学] [农业科学] [农业科学]