导　　师： 谢庆阁

学科专业： I0602

授予学位： 博士后

作　　者： ;

机构地区： 中国农业科学院

摘　　要： 本文以基因克隆、表达和淋巴细胞杂交瘤技术为基础,制备并鉴定了针对秦川黄牛成熟朊蛋白mprp的单抗,以期用于疯牛病的免疫诊断研究. 在秦川黄牛、甘肃土种绵羊和汉族人朊蛋白prp和叠朊dpl编码基因0rf的基础上,进一步构建出含成熟蛋白编码基因的重组表达质粒,经iptg诱导实现了3个mprp和13个mdpl的e.coli中的高效表达.以saf-70单抗为检测抗体的western blot分析表明3个重组mprp不仅具有强的反应原性而且能够在细胞内形成二聚体.蛋白酶k消化结果农明重组mprp不具有朊病毒prp<'sc>的蛋白酶k抗性. 以纯化复性的黄牛mprp免疫balb/c鼠,加强免疫3天后取脾细胞与sp2/0细胞融合,间接elisa法筛选阳性细胞株,并进一步鉴定和层析法纯化的腹水抗体.结果表明获得了7个能稳定分泌抗黄牛mprp的细胞株,除n17抗体属于igg2b外,其余均属于igg2a.7个单抗腹水效价介于1×10<'4>-1×10<'4>之间,亲和常数介于10<'9>-10<'12>之间,与黄牛mprp发生特异性反应,与绵羊和人的mprp发生交叉反应,不与mdpl反应.表位分析显示单抗n15,n25,n59,n63和n67识别相同的抗原表位,单抗n17和n64识别mprp羧基端的不同表位.western blot分析表明腹水单抗n64和n17可与健康黄牛脑组织prp<'c>反应.实验获得的单抗n64和n17有望作为疯牛病的核心诊断试剂,为开发相关诊断试剂盒奠定了基础.

关 键 词： 疯牛病 朊蛋白 朊病毒 叠朊 单克隆抗体 诊断试剂

分 类 号： [S858.23 S852.5]

领　　域： [农业科学] [农业科学] [农业科学] [农业科学] [农业科学] [农业科学]