导　　师： 黄永芳

学科专业： I0702

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 本研究选择了广东省乳源大桥镇、潮州凤凰山、广州帽峰山、信宜大雾岭、乐昌、深圳梧桐山、惠州南昆山等7个有代表性的地区作为野百合(liliumbrowniif.e.brownexmiellez)天然居群的采样点，对采集到的199份样品进行了形态学及随机扩增多态性dna(rapd)分析，以研究样品的遗传多样性及遗传结构，并对原变种野百合及变种百合(l.browniif.e.brownexmiellezvar.virdulumbaker)的分类作分析探讨。获得的主要结果如下： 1.以新鲜叶片、硅胶干燥叶片及鳞片为材料分别提取dna，199个样品用三种方法都成功提取出质量较高的dna，并能扩增出清晰、明亮、稳定的rapd条带。其中以鳞片为材料的样品dna提取方法具有重要的实用性。 2.通过对样品rapd反应体系及程序中影响扩增结果因素的分析，建立了rapd的优化反应体系及扩增程序：在20μl反应体系中，含20ng模板dna，2.0mmmg2+，0.2mmdntps，1.5utaqdna聚合酶，0.3μm随机引物；94℃预变性5min，然后94℃30s，38℃50s，72℃1min，35个循环，最后72℃延伸10min，4℃保存。 3.从273条10聚寡核苷酸随机引物中筛选出20条随机引物，对7个居群共199个野百合及百合样品进行rapd扩增，每个引物扩增出14～29条谱带，对所有个体共检测到433条谱带，其中多态性条带为430条，所有个体的多态性条带百分率(ppb)为99.31％，各居群的平均多态位点比率为60.67％。 4.shannon多样性信息指数(i)及nei基因多样度(h)计算结果表明，惠州南昆山(h)居群的遗传多样性最高，广州帽峰山(g)居群的遗传多样性最低。7居群遗传多样性的排列次序为：惠州南昆山(h)居群＞乳源大桥镇(r)居群＞潮州凤凰山(c)居群＞乐昌(l)居群＞深圳梧桐山(s)居群＞信宜大雾岭(x)居群＞广州帽峰山(g)居群。 5.7个居群间的遗传相似系数在0.9258和0.9720之间，居群间遗传距离在0.0284和0.0771之间，表现了居群间高度的遗传一致性；基因分化系数(gst)为o.1997，表明7个居群间存在着比较高的遗传分化；amova分析显示，有24.67％的变异发生于居群间，而各居群内则包含了75.33％的遗传变异，居群分化较大，显著性检验也说明居群间存在着显著的遗传分化。样品个体的聚类分析结果显示同一居群的不同个体大部分聚在同一亚类中，也表明居群间产生了明显的分化，与amova分析的结果一致。 6.根据7个居群间的遗传距离分析和居群聚类图，本研究认为广东省野百合7个天然居群可分为东(r、c、g、l、s、h)西(x)两支。 7.对广州帽峰山(g)、信宜大雾岭(x)、乐昌(l)、深圳梧桐山(s)及惠州南昆山(h)居群140份样品的22个形态性状的巢式方差分析结果表明，平均有35.43％的变异存在于居群间，有64.57％的变异存在于居群内个体间。 8.通过对5个居群140份样本(其中百合29份)基部成熟叶的叶型性状分析后提出“凡同时符合叶长/基宽距＜2以及叶长/叶宽＜5两个条件的样品为变种百合，否则为原变种野百合”的野百合与百合形态分类的量化分类标准。这一标准对野百合及百合的形态分类有重要的意义。通过对7个居群199个个体的rapd数据的upgma聚类分析，在遗传相似系数为0.68处发现同一居群内的所有百合个体和野百合个体在聚类图中表现了明显的分离，这是原变种野百合及变种百合的区别在分子水平上很好的反映。

关 键 词： 野百合 天然居群 遗传多样性 遗传结构 分析

分 类 号： [Q347]

领　　域： [生物学]