导　　师： 贺秉军

学科专业： G1002

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 南开大学

摘　　要： 论文用全细胞膜片钳技术在急性分离培养的棉铃虫中枢神经细胞和海马锥体神经元上，分别观察三氟氯氰菊酯对棉铃虫和海马神经细胞通道电流的作用影响。旨在研究杀虫剂对棉铃虫中枢神经细胞钾通道有无作用以及作用机制，进一步研究棉铃虫抗性形成机制；研究杀虫剂对哺乳动物神经细胞钠钾通道的毒性影响及作用方式，探讨杀虫剂对害虫和哺乳动物神经细胞毒性的差异，以期为设计具有新靶标和对害虫高效、对哺乳动物低毒的有效药物提供理论依据。主要实验结果如下： 1.细胞培养：分离得到的棉铃虫和海马神经细胞，胞体明亮，有较长突起，细胞表面光洁，有较强的光晕，立体感强，贴壁良好。 2.三氟氯氰菊酯对棉铃虫神经细胞瞬间外向钾电流的影响：结果表明，加药前通道在-40mv左右激活，三氟氯氰菊酯(10-5mmol/l)作用后，激活电压向负电位方向移动约10mv，通道在-50mv左右激活，电流幅值未有明显变化；加药前后激活曲线的vh、k值和形状无明显改变；失活曲线左移且vh变化明显，给药前后的vh和k分别为-48.472±0.763、8.123±0.672和-59.299±1.46、10.573±1.36。但k值没有明显变化。 3.三氟氯氰菊酯对棉铃虫神经细胞延迟整流钾电流的影响：结果表明，药物作用前分别有81％和39％的细胞的通道在-30mv和-40mv激活(n=21)。三氟氯氰菊酯(10-5mmol/l)作用15min后，分别有63％和38％细胞的通道在-40mv和-50mv激活(n=8)；作用1min后电流幅值明显降低，抑制率达到了37.7％(n=19)；加药后激活曲线明显左移且vh值变化显著，给药前后的vh和k分别为11.4±2.32、20.5±2.19和2.45±0.878、24.9±1.15。 4.三氟氯氰菊酯对大鼠海马锥体神经元钾电流的作用影响：结果表明，低浓度(10-7mmol/l)和高浓度(10-5mmol/l)三氟氯氰菊酯对瞬间外向钾通道分别有激活和抑制作用，但它们对峰电流的改变没有显著性差异。高浓度三氟氯氰菊酯使通道激活曲线稍微右移，vh和k改变不明显；但是能够使通道失活曲线明显左移，给药前和给药后10minvh和k分别为-70.711±0.445mv、7.2840±0.403和-90.398±0.839mv、11.602±0.658，半数激活电压vh改变显著。但试验中发现药物对延迟整流钾电流峰值没有影响。 5.高浓度三氟氯氰菊酯对大鼠海马神经元钠通道的影响：高浓度三氟氯氰菊酯(10-3mmol/l)作用后，海马锥体神经元钠电流显著降低，最大抑制率为32.6％。钠通道的激活电位在-70mv左右，药物作用前后改变不大。峰值电压左移大约10mv。激活曲线的vh向负方向移动8mv左右。但是失活曲线的vh向负方向移动17mv左右。但k值没有明显变化。 6.低浓度三氟氯氰菊酯对大鼠海马神经元钠通道的影响：低浓度三氟氯氰菊酯(10-5mmol/l)作用后，海马锥体神经元钠电流峰值增加明显，最大增加率为26.6％。钠通道的激活电位向超极化方向移动10mv左右。峰值电压移动20mv，从-30mvto-50mv。激活曲线的vh向负方向移动10mv左右，k值变化显著。失活曲线的vh向负方向移动8mv左右。 实验结果表明：三氟氯氰菊酯促进了棉铃虫神经细胞瞬间外向钾通道的失活。显著抑制延迟整流钾电流电流峰值，棉铃虫中枢神经细胞钾通道也是拟除虫菊酯类药物的作用靶标之一。大鼠海马锥体神经元钾通道是三氟氯氰菊酯的作用靶标，通道失活失活曲线的改变是药物作用的主要方式。不同浓度三氟氯氰菊酯对大鼠海马神经元钠电流有不同的作用影响，激活电位、峰值电压、激活曲线和失活曲线均向超极化方向移动，但是高浓度药物作用下失活曲线改变更为显著，低浓度药物作用下激活曲线改变更为显著。

关 键 词： 三氟氯氰菊酯 棉铃虫 钠通道 钾通道 全细胞膜片钳技术 海马神经元 大鼠

分 类 号： [S433.4 TQ453.292]

领　　域： [农业科学] [农业科学] [化学工程]