导　　师： 姜子德

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 香蕉(musaspp．)是发展中国家第四大粮食作物，也是广东省栽培最大宗的一种水果。但是，香蕉枯萎病[fusariumoxysporumf．sp．cubense(foc)]严重威胁了香蕉的生产。本研究通过一系列农杆菌介导的转化(agrobacteriumtumefaciensmediatedtransformation，atmtl试验，摸清了影响转化效率的主要因素；在优化了的转化体系下，进行了大规模的转化和筛选试验，并对所筛选的4个目标突变体的生物学特性和致病性等进行了较深入的研究，旨在建立有效的农杆菌介导foc随机转化体系，为香蕉枯萎病菌生物学特性和致病机理的研究提供技术和方法上的参考。主要结果如下： 1、研究了共培养温度、共培养时间、共培养ph值、农杆菌预诱导时间等因素对转化效率的影响，获得了最优转化体系：od值为o．15的农杆菌培养液在im液体中预诱导6—14h，各取1∞μl农杆菌培养液和105／mlfoc4孢子悬浮液，均匀涂布在ph值为5．5im固体平板上，于25。c下共培养48h，转化效率达到每105foc4孢子悬浮液210-250个转化子。此转化条件保证在最短时间内，获得最多的转化子，并且转化子不容易出现假阳性。 2、依据接种后幼苗假茎基部和第2、3片叶子病变程度，首次制定发病幼苗病情分级标准，并结合发病率，明确了组培香蕉幼苗浸根接种可以用来进行快速侵染鉴别试验和致病相关突变体的筛选。病情调查方法不仅操作性强、直观，而且结果可靠、省时省力，经过多次少量接种可以快速有效地在大量的转化子库中筛选到致病力减弱突变体。 3、首次用atmt方法对香蕉枯萎病菌4号生理小种进行遗传转化研究，建立了含有4000个转化子的转化子库，并获得两个致病性减弱突变体b2376和b2377；两个生物学性状变化突变体b2171和b2399。通过对目标突变体生物学特性研究，证明了大孢子粘孢团产生时间、产孢量、菌落直线生长、菌丝生长量等与致病性无相关性。 4、通过tail-pcr和克隆等技术得到了目标突变体基因的部分序列，在genbank中进行blastx分析，突变体b2377突变基因的部分序列编码的氨基酸与aspergillusfumigatus的一个氧化还原脱氢酶(adh-short)、与gibberellazeae、aspergillusnidulans、magnaporthegrisea的类似物同源率分别是48％、69％、46％、41％，均含有adh-short蛋白的部分保守区；突变体b2399突变基因的部分序列编码的氨基酸与neurosporacrassa、gibberellazeae、aspergillusoryzae类似物同源率达53％、52％、43％，编码未知功能蛋白，这些未知功能的蛋白与丝氨酸或苏氨酸蛋白酶(serine／threonineproteinkinases，s-tkc)有共同的保守区。突变体b2171和b2376突变基因的部分长分别是1290bp和2019bp，经blastx搜索，没有相似序列被报道，需进一步研究。

关 键 词： 香蕉 枯萎病菌 农杆菌介导转化 转化效率 基因克隆

分 类 号： [S432.1 S668.1]

领　　域： [农业科学] [农业科学] [农业科学] [农业科学] [农业科学]