导　　师： 陈宏;马润林

学科专业： G1007

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 西北农林科技大学

摘　　要： ω-3多不饱和脂肪酸对于维持有机体的正常生长和发育是必需的，并且在医药学领域和营养学领域起着非常重要的作用。ω-3脂肪酸在人体中的含量是很低的，而ω-6脂肪酸的含量很高，造成ω-6/ω-3脂肪酸比例远远大于10∶1。由于ω-6和ω-3脂肪酸在代谢和功能上的截然不同，以及它们具有许多相互对立的生理学功能，因而二者的平衡对于有机体自身的稳定和正常发育非常重要。目前，提升ω-3脂肪酸的含量主要是通过对富含ω-3脂肪酸的食物的长期摄取，因为人体自身缺少相应的酶类不能合成ω-3脂肪酸前体物，并且不能将ω-6脂肪酸转化为ω-3脂肪酸。尽管从食物中摄取ω-3脂肪酸是一个很安全的方法，但却有明显的局限性。 本文首先利用rt-pcr方法从线虫中克隆到一个名为fat-1的基因，它编码的蛋白是在多不饱和脂肪酸合成过程中一个重要的脂肪酸脱氢酶-ω-3脂肪酸脱氢酶。它可以通过在碳氢化合物链上引入一个ω-3双键从而催化ω-6脂肪酸转化为ω-3脂肪酸。通过生物学软件对线虫的fat-1基因序列进行分析后，将fat-1n端亲水区克隆至原核表达载体pgex-4t-2，构建了重组质粒pgex-fat1-n。将重组表达质粒pgex-fat1-n转化大肠杆菌，获得了gst-fat1-n融合蛋白。对表达产物进行纯化后制备了抗表达产物的抗体，用酶联免疫吸附试验检测抗体的效价很高。 构建两个真核表达载体：融合表达质粒pfat1-gfp和非融合表达质粒pfat-1。纯化后的质粒转染hek293t细胞，使线虫fat-1基因在细胞中表达。结果表明fat-1基因的表达产物ω-3脂肪酸脱氢酶可催化细胞内ω-6脂肪酸(la)转化为ω-3脂肪酸(ala)，并且使二者的比例由原来的24∶1变为5∶1。 研究结果表明，通过将线虫编码ω-3脂肪酸脱氢酶基因的基因转移，不仅可以实现其他物种中ω-3脂肪酸含量的提高，同时还可以降低过多的ω-6脂肪，使ω-6/ω-3脂肪酸的比例达到平衡。本研究阐述了一种可调节体内脂肪酸成分的有效方法，为在试验和临床研究中应用基因转换奠定了一定的基础，为在人类基因治疗方面应用非同源基因提供了一定的依据。

关 键 词： 线虫 脂肪酸脱氢酶 基因 基因克隆 基因表达

分 类 号： [Q785 Q554.9]

领　　域： [生物学] [生物学]