导　　师： 曾振灵

学科专业： I0601

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 本研究旨在建立一种快速有效的检测动物性食品中氟甲喹的残留方法。研究中采用碳二亚胺法和混合酸酐法将flu和bsa、ova偶联，合成人工免疫原和包被原，并用紫外扫描对抗原进行初步鉴定。 用合成的免疫抗原对8只新西兰白兔进行免疫，经间接elisa测定，抗血清效价均达到1∶320，000以上，选取效果最好的抗血清进行纯化，纯化后抗体效价达1∶2560，000。同时对相关的elisa条件进行优化，确定flu-ova的最适包被浓度为1.25μg/ml，对应抗体的工作浓度为1∶160，000，酶标二抗浓度为1∶40，000。利用kcjunior软件对标准曲线进行非线性回归，得到该方法标准曲线的ic50为1ong/ml，r2=0.9972，标准曲线在1ng/ml～250ng/ml之间线性良好，而且该抗体对参与测试的5种同类药物均无交叉反应。该方法还有待进一步研究改进，以用于实际样本中的氟甲喹残留检测。 用免疫原041122和免疫原041129分别免疫balb/c小鼠，小鼠效价均能达到1∶51200～1∶102，400。用杂交瘤技术经过4次克隆后，获得10株能稳定分泌抗氟甲喹抗体的杂交瘤细胞株。对其中2株特异性较好的细胞株2d12和3e2进行分析鉴定，得出两株细胞上清效价均在1∶4000以上，ic50分别为55ng/ml和75ng/ml；细胞上清液对参与测试的5种同类药物恩诺沙星、二氟沙星、氧氟沙星、噁喹酸和诺氟沙星的最高交叉反应率为1％。利用2d12细胞株制备腹水，纯化后腹水效价可以达到1∶640，000以上。 以单抗为基础研制了用于检测氟甲喹残留的酶联免疫试剂盒，本研究通过样品添加回收试验验证试剂盒的适用性。实验结果表明，试剂盒对鱼肉和虾肉的最低检测限分别为2.20μg/kg和2.30μg/kg；鱼肉和虾肉组织中添加12.5ng/g、25ng/g和50ng/g三个浓度的回收率均达到75％以上，批内变异系数和批间变异系数均小于25％，与高效液相分析方法的添加回收率基本吻合，符合残留分析的要求，可在实际检测中应用。

关 键 词： 氟甲喹 多克隆抗体 单克隆抗体 间接竞争 人工免疫原 包被原

分 类 号： [S859.79]

领　　域： [农业科学] [农业科学] [农业科学]