导　　师： 杨爱芳

学科专业： G1009

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 山东大学

摘　　要： 草地早熟禾(poapratensis l．)属冷季型草坪草，是温带地区重要的草种之一。它具有色美、抗寒、耐荫、耐修剪等优点，在我国北方地区多被用于建造草坪。但草地早熟禾也有一些缺点，如易受病虫危害、不耐炎热、耐低温能力差、抗旱力不强等，这极大地限制了草地早熟禾在炎热地区的推广。由于草地早熟禾为兼性无融合生殖方式，采用常规育种方法培育早熟禾耐热新品种困难较大。因此，利用基因工程的手段来改良草地早熟禾的耐热性成为当务之急。现有的草地早熟禾遗传转化体系存在着植株再生困难、体细胞无性系变异发生频率高以及转化周期长、效率低等缺点，严重制约了早熟禾基因工程育种研究的发展。 本研究首先建立了草地早熟禾丛生芽离体培养体系。该体系是以草地早熟禾种子苗茎尖为外植体，切取茎尖(含胚轴和生长点)在附加0.5mg/l 2.4-d和3.0mg/l 6-ba的培养基上诱导基部膨大，切下膨大的基部转至附加2.0mg/l 6-ba的培养基上诱导产生丛生芽，然后将丛生芽转入附加3 0mg/l 6.ba和0.07mg/l 2.4-d的培养基上继代培养，使丛生芽大量扩增。 以两个草地早熟禾栽培品种纳苏(nassau)、mardona的丛生芽芽尖为受体，通过农杆菌介导的方法将来源于玉米、编码热激蛋白101(hsp101)的hsp101 基因导入草地早熟禾丛生芽块中。取继代培养5-7天的从生芽切至暴露出芽尖生长点，与农杆菌菌液浸染，同时在0.5mpa负压下处理5min，不吸去芽尖表面多余菌液，将芽尖转移到丛生芽诱导培养基上，黑暗条件下共培养3天，然后将芽尖转移到添加100mg/l头孢霉素的培养基上抑菌培养20天，再转移到加有6.0mg/l潮霉素的筛选培养基上连续筛选3代，每代10天。存活的抗性芽经增殖后，转入生根培养基，20天后移栽入花盆中。对转化植株进行pcr和pcr-soutllern biotting分析表明外源基因hsp101已经转移到草地早熟禾细胞中。 研究了影响转化效率的因素，发现侵染时农杆菌菌液浓度、as的诱导、真空渗入处理及处理时间均能影响转化率。适宜的转化参数为菌液浓度od<,600>=0.6、添加0.1mmol/l的as、在负压0.5mpa下浸染5min。 对转基因株系进行的耐热性分析表明：转基因株系对高温胁迫的抗性与对照植株相比均有不同程度的提高，说明通过导入hsp101基因获得耐热性提高的草地早熟禾转基因植株是可行的，这种耐热性提高的草地早熟禾在城市绿化方面具有重要的应用前景。

关 键 词： 草地早熟禾 丛生芽 农杆菌介导 遗传转化 耐热性 热激蛋白基因

分 类 号： [S688.4]

领　　域： [农业科学] [农业科学]