导　　师： 陈立侨

学科专业： G1002

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 华东师范大学

摘　　要： 本论文采用多元统计分析、生化成分测定、pcr扩增及dna测序和毒理学等方法，对不同遗传背景的罗氏沼虾(macrobrachiumrosenbergii)群体的形态特征、营养品质、基因变异及幼体的抗逆性等进行了比较的研究。通过综合分析，较全面和准确地揭示出不同群体之间的形态和营养品质的差异、遗传特征以及幼体抗逆性与亲体之间的关系。 一、不同罗氏沼虾群体形态差异的比较研究采用三种多元分析方法，对8个罗氏沼虾(macrobrachiumrosenbergii)群体(浙江养殖群体，缅甸引进群体子二代及6个不同组合杂交群体)的12个形态比例参数进行比较研究。聚类分析和主成分分析法对雌、雄虾的分析结果表明：6个杂交群体的形态较为接近，而与养殖群体和缅甸引进群体子二代的趋异程度逐渐增加。构建的5个雌体主成分中，方差贡献率分别为主成分(1)26.191％、(2)16.036％、(3)13.309％、(4)10.769％、(5)10.166％，累积贡献率为76.471％。相应地，雄体的方差贡献率分别为主成分(1)25.206％、主成分(2)20.277％、主成分(3)16.985％、主成分(4)13.222％、主成分(5)8.945％，累积贡献率为84.634％。判别分析结果显示，8群体之间的形态参数之间有极显著的差异(p=0.01)；8群体雌体判别函数的判别准确率p1为60.03％～100.00％，p2为33.30％～100％，综合判别率为92.1％；雄体判别准确率p1为20.00％～100.00％，p2为20.00％～100％，综合判别率为86.4％。其中判别函数对养殖群体，缅甸引进群体和“南太湖1号”杂交群体三个群体的判别准确率较高。综上所述，养殖群体、缅甸引进群体和“南太湖1号”群体在形态上已经出现了明显的分化，并独立成为三个不同的种群；其他杂交群体由于同时综合了养殖群体和引进群体两者的相关性状，形态上没有呈现显著的差异(p＞0.05)。 二、罗氏沼虾三群体间肌肉营养成分及消化酶活性比较试验对三群体罗氏沼虾(macrobrachiumrosenbergii)肌肉营养成分以及消化酶进行了分析，该三群体分别为浙江南太湖养殖群体(a)、缅甸引进野生群体子二代(b)和“南太湖1号”杂交群体(b-+)。结果表明，“南太湖1号，，杂交群体(b-+)粗蛋白含量为(17.57±2.19)％，高于其他两个群体；而本地养殖群体粗脂肪含量最高，达(2.04±0.12)％，显著高于缅甸引进种(b)和杂交群体(b-+)(p＜0.05)。三群体中，b-+总氨基酸含量、必需氨基酸含量、鲜味氨基酸和epa+dha含量均为最高，分别为76.92％、40.87％和27.54％，a群体的上述各项指标均为最低，分别为73.90％、39.02％、16.97％；相比之下，b-+的必需氨基酸指数最为均衡，b-+(68.06)＞b(67.65)＞a(65.67)。消化酶活性总体趋势为：群体b、b-+各种消化酶活性都较高，而群体a活性较低。经统计分析，群体b、b-+各种消化酶活性都显著高于群体a(p＜0.05)(类胰蛋白酶极显著(p＜0.01))；而群体b、b-+之间除脂肪酶外都没有显著性差异(p＞0.05)。由此可以得出上述三群体中，杂交群体(b-+)无论是营养品质还是在消化酶活性方面都优于其他群体，其次是缅甸野生群体(b)，而本地养殖群体(a)的各项指标都较差。 三、罗氏沼虾三群体间线粒体d-loop基因的初步研究首先从genebank查到的罗氏沼虾线粒体d-loop基因序列，共有931个碱基，由于d-loop基因序列的特殊性(a+t含量很高)，引物设计时从其两侧的基因设计引物，根据基因序列用primer5软件设计合成5对引物，对浙江养殖群体(a)、缅甸野生群体子二代(b)和“南太湖1号”杂交群体(b-+)d-loop基因进行pcr扩增。然后筛选出其中一对扩增效果最好的一对引物，通过优化得到了pcr扩增的最佳条件：50ul的反应体系中包括10×buffer5μl，模板量200～300ng，10mmdntp1μl，2.5mmmg2+5μl，0.5μmeach引物2.5μl，5utaqdna聚合酶0.4μl，其余部分用无菌三蒸水补足；循环参数为94℃预变性4.5min，94℃变性1min，40℃复性1min，72℃延伸90s，设定40个循环，最后72℃延伸10min。研究结果表明，在线粒体d-loop基因序列方面，这三群体的罗氏沼虾并没有出现明显地分化。提示罗氏沼虾虽然经过多年的人工养殖，但在变异速度较快的线粒体d-loop基因水平上，与野生群体还没有产生明显的分化。研究同时表明，野生群体内个体遗传多样性较大，而养殖群体内个体差异较小，同时养殖群体内的所有个体都有出现了一个碱基缺失。养殖群体的遗传多样性变小，很多研究已经证明了这一点，是因为长期的人工养殖、近亲繁殖所导致。而碱基出现缺失现象的原因还有待于进一步研究。 四、罗氏沼虾三群体幼体抗逆性差异的初步研究本研究分别从幼体的生长、发育、抗逆性三个方面综合评价浙江养殖群体(a)、缅甸野生群体子二代群体(b)和“南太湖1号”杂交群体(b-+)三群体罗氏沼虾幼体的品质。整个幼体发育过程中，“南太湖1号”群体生长速度最快，缅甸野生群体次之，浙江养殖群体最差。从幼体的发育变态情况来看，三群体幼体发育的同步性没有表现出明显的差异。在幼体的整个发育过程中，三群体幼体对氨氮(总氨氮和非离子氨氮)的24-hlc50都是随着发育过程的进行而逐渐增大，并且三群体幼体发育到第16天(约Ⅸ期幼体)时，对非离子氨的耐受能力均最强。比较而言，缅甸野生群体(b)幼体对非离子氨抗逆性最强，养殖群体(a)次之，“南太湖1号”杂交群体(b-+)最差。杂交群体在生长方面表现出明显的优势，而在幼体抗逆性方面不如野生群体，其原因有待进一步研究。

关 键 词： 罗氏沼虾 群体 营养品质 遗传特征 基因变异 序列多态性 抗逆性

分 类 号： [Q959.223.63]

领　　域： [生物学]