导　　师： 杨中艺

学科专业： G1012

授予学位： 博士

作　　者： ;

机构地区： 中山大学

摘　　要： 多年生黑麦草(loliumperennel.)是一种应用广泛的禾本科牧草和草坪草，在世界各地的温带地区均有分布，适宜在我国北方大部分地区种植。黑麦草喜欢温凉湿润的气候，其个别品种具有较好的耐盐耐旱性，但绝大多数品种耐盐性较差，这限制了在我国北方地区的种植。为此，利用植物基因工程技术，进行多年黑麦草抗旱耐盐性的遗传改良具有十分重要的意义。 本文研究分析鉴定了22种现有多年生黑麦草种质资源的耐盐性，筛选出优良品系：评价了11个草坪型多年生黑麦草品种在组织培养中的表现；通过农杆菌介导法将甜菜碱脱氢酶(badh)基因导入多年生黑麦草，获得具有抗旱耐盐碱特性的多年生黑麦草新品种 1.多年生黑麦草种质资源的抗旱耐盐性的筛选本文应用模糊隶属函数法，以发芽率、发芽势、叶片组织含水量、叶绿素含量、脯氨酸含量和丙二醛含量对耐盐性有不同程度贡献的指标为依据，对22个多年生黑麦草品种进行了耐盐性评定，结果表明，模糊隶属函数法可以避免单一指标的片面性，能较全面地评价黑麦草的耐盐性。将这22种个黑麦草品种耐盐性可归为四类，即强耐盐性品种为：执着和草坪星；较强耐盐品种为爱神特、旋风、顶峰、百嬉、apm、百尼牧、百瑰和百宝；中等耐盐品种为牛头、维多利亚、首相、马蒂达、和平、百莱特、绿宝石、雅晴；不耐盐品种为百乐、赛宝、百克来、海鸥。 2.多年生黑麦草组织培养再生体系的建立本研究以多年生黑麦草成熟种子为外植体，在不同的2，4-d和6-ba浓度下进行愈伤组织诱导以及不同kt浓度下进行植株再生，并且评价了11个草坪型多年生黑麦草品种的愈伤组织诱导率和植株分化率。结果表明，在2,4-d5mg/l和6-ba0.05mg/l的浓度配比情况下，愈伤组织的质量和诱导率最优；愈伤组织的分化以附加6-ba3mg/l、naa1mg/l以及kt1mg/l的ms培养基分化率最高。不同品种多年生黑麦草之间，愈伤组织诱导率和分化率存在明显差异，总的植株再生率较高的品种有百尼牧、和平、绿宝石和首相。 3.农杆菌介导的甜菜碱脱氢酶(badh)基因对多年生黑麦草的转化同一植物材料对不同的筛选剂的敏感性不同，另外不同的植物种类、不同的品种对同一筛选剂的敏感性也不同。本文建立了黑麦草抗性愈伤组织的筛选方案：潮霉素应以30mg/l浓度下筛选60d或50mg/l浓度下筛选40d为宜。 利用农杆菌介导法，用甜菜碱脱氢酶(badh)基因转化多年生黑麦草愈伤组织，获得17株经pcr检测和pcr-southern分析为阳性的转基因植株。田间实验证明，转化植株具有很好的耐盐性，在1.5％nacl盐浓度下生长良好，而对照植株几近死亡，其生长完全被抑制。

关 键 词： 多年生黑麦草 耐盐性 组织培养 农杆菌

分 类 号： [S543.6]

领　　域： [农业科学]