导　　师： 金勇丰

学科专业： G1010

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 浙江大学

摘　　要： 可变剪接是真核生物RNA转录后加工的一种重要的调控机制。互斥剪接是一种特殊的受到严格调控的可变剪接形式,它能够增加蛋白质的多样性。互斥剪接即互斥外显子簇中有且只有一个可变外显子被选择进入成熟的mRNA,从而形成不同的蛋白质异构体。针对互斥剪接的机制,科研人员提出了几种调控模型来予以解释。MRP基因编码的多药耐药性蛋白是ATP结合域的跨膜转运蛋白超家族成员之一,是引起肿瘤细胞多药耐药性的一个因素。在黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)中,MRP1的第八组外显子含有7个互斥外显子。本研究首先应用生物信息学的方法得到14种果蝇物种的MRP1基因序列,分析黑腹果蝇的EST序列以及互斥外显子的进化关系。野生型的minigene中主要表达外显子8.4,接下来是外显子8.1和8.8。通过一系列的删除表达载体的构建,发现在外显子8.4上游的108bp和8.4下游的244bp中存在调控元件。这些初期的实验数据为研究MRP1的互斥剪接调控机制打下了基础。Ⅰ型糖尿病是一种器官特异性的自身免疫疾病,它是由于分泌胰岛素的β细胞损伤而造成的。霍乱毒素B亚基(CTB)作为一种强大的免疫粘膜载体分子,能够有效的促进口服免疫耐受。本研究构建了CTB与人GAD65的融合基因的表达载体,通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在DH10Bac感受态细胞中发生转座重组,利用三抗和蓝白斑筛选得到重组的Bacmid质粒。把Bacmid质粒成功转染家蚕BmN细胞获得CTB-hGAD65杆状病毒。将重组病毒感染家蚕BmN细胞进行Western blot检测后,检测到了未加热前的五聚体融合蛋白(105kDa)和加热后的单聚体(21kDa)。用GM1-ELISA来分析融合蛋白的五聚体活性,结果表明CTB-hGAD65融合蛋白的GM1受体结合能力低于CTB标准品的结合能力。

关 键 词： 互斥剪接 黑腹果蝇 型糖尿病 霍乱毒素 亚基 谷氨酸脱羧酶 家蚕 杆状病毒表达系统

分 类 号： [Q75]

领　　域： [生物学]