导　　师： 周慧

学科专业： G1010

授予学位： 博士

作　　者： ;

机构地区： 吉林大学

摘　　要： 细胞色素P4502C9 (CYP2C9)负责16%的临床常用药物的代谢,其基因多态性决定了相关药物代谢的个体和种族差异。体外酶催化能力测定结果表明,CYP2C9*13 (Leu90Pro)等位基因明显地降低了对不同CYP2C9酶底物药甲苯磺丁脲,双氯芬酸,氯诺昔康和化学发光底物虫荧光素H的代谢。我们将第90位氨基酸分别用性质类似或不同的氨基酸替代,在COS细胞系统中表达,并测定了酶催化活性。我们利用分子动力学模拟方法构建了CYP2C9各突变体的三维模型,分析90位氨基酸对突变体酶分子结构的影响,并且利用分子对接研究了突变体与底物之间的相互作用。实验结果表明突变体CYP2C9 L90E和L90P对双氯芬酸、氯诺昔康和化学发光底物的Vmax与野生型相比明显下降,模拟计算表明:在90位Leu被Glu和Pro替代后,底物进入酶催化中心的通道入口比野生型明显缩小,阻碍了底物进入活性部位,导致活力明显下降;而碱性氨基酸Arg的突变体L90R对三种底物的Vmax明显高于野生型。总之,第90位氨基酸的取代对CYP2C9的催化活性的影响是由于:底物进入通道入口的大小、活性部位口袋的形状、静电电荷分布和热稳定性。本研究表明非活性部位的氨基酸也会对酶蛋白的活性和稳定性产生重要影响。本论文利用杆状病毒载体的Sf9昆虫细胞表达系统,建立了CYP2C9、CPR的高效表达体系,构建了有效的P450-CPR酶反应体系。

关 键 词： 细胞色素 突变体 分子模拟 催化活性 杆状病毒表达

分 类 号： [Q559.9]

领　　域： [生物学]