导　　师： 卢强

学科专业： I0602

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 吉林大学

摘　　要： 本研究以鲤PA28-α亚单位cDNA3′端部分片段为核酸探针,应用核酸杂交法筛选有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库,克隆了PA28-α亚单位cDNA,全长1097bp,含有编码249个氨基酸的开放阅读框,推测的蛋白序列与斑马鱼PA28-α同源性高达92%,GenBank获得注册号为DQ453126。PCR方法克隆了PA28-α基因组DNA,全长3583bp,含有11个外显子和10个内含子且内含子外显子剪接位点均遵守GT-AG规则,获得GenBank注册号为EF051469。此外,根据PA28-αcDNA设计引物,半定量RT-PCR方法分析了正常白细胞和丝列原刺激的白细胞中该基因不同时间的转录差异,还分析了其组织转录谱。结果显示:丝裂原刺激白细胞中PA28-α转录增强,尤其是ConA刺激后增强尤为显著,但是随着时间的延长增强幅度下降。提示PA28-α的转录对于不同的诱导物敏感程度不同,也说明细胞受刺激早期发挥免疫作用;在鲤鱼鳃、肾、脾脏、肌肉、脑、心、肝七个组织均有转录,嗜水气单胞菌Ahcs01菌株刺激鲤鱼48小时后转录不同程度增强,其中与免疫相关的组织增强明显,脾脏尤为显著,这与PA28-α在MHCⅠ类分子介导的抗原呈递过程中具有重要作用相一致。

关 键 词： 鲤鱼 克隆 基因组 克隆 序列分析 转录分析

分 类 号： [S917.4;Q78]

领　　域： [农业科学]