导　　师： 郭勇

学科专业： H2203

授予学位： 博士

作　　者： ;

机构地区： 华南理工大学

摘　　要： 最初诱导出的玫瑰茄（Hibiscus sabdariffa L.）愈伤组织为黄色，不产花青素。调整B₅培养基中的某些成分，使其含1mg／L2，4—D、0.2mg／LKT，于25℃、16h／d光照培养愈伤组织。经过数代继代培养、黄色愈伤组织内出现红色“色素区”，适宜于高产花青素玫瑰茄细胞系的筛选。在光学显微镜下观察，细胞中的色素颗粒（anthocyanoplasts）呈现桔黄、桔红、粉红、红及紫等颜色，这些色素颗粒既存在于细胞质中也存在于液泡中。而且在非着色细胞的液泡中发现了紫色的小色素颗粒。玫瑰茄愈伤组织中的花青素可能在这些特定的细胞器（anthocyanoplasts）中生产、积累，然后释放到液泡中。 用平板培养及小细胞团培养两种方法筛选高产花青素的玫瑰茄细胞系。悬浮培养8天左右的玫瑰茄细胞最适宜于单细胞分离；pH5.84，CaCl₂·2H₂O为750mg／L的B₅培养基中植板率最高。植板细胞密度低于6×10³ cell／ml时，植板率急剧下降。于玫瑰茄愈伤组织的高色素区选择色深且颜色均一的小细胞团，置于B₅培养基（pH5.84，CaCl₂·2H₂ O:750mg／L）上培养。成活的细胞系与小细胞团继代培养10次，高产细胞系花青素含量为2.33％（g／g dw.），比筛选前提高了14.5倍。 用B₅培养基悬浮培养产花青素的玫瑰茄愈伤组织。培养13天时，花青素产量达0.25g／L。培养基中添加终浓度为10^-6 mol／L的外源L—Phe能显著地增加悬浮细胞花青素的积累量。浓度为10^-7 mol／L的槲皮素，可使悬浮培养的玫瑰茄细胞花青素产量2.3倍。无论是L-Phe还是槲皮素均不能启动不产花青素的细胞系积累花青素。 金属离子能提高培养细胞花青素的产量。改变B₅培养基中钙、锰、铜、铁等离子的浓度，悬浮培养玫瑰茄细胞。增加铁离子的浓度使花青素产量下降。其它三种离子对花青素的生产均有促进作用。其中锰离子最为有效，浓度为6×10^-4mol／L时，花青素产量为0.34g／L，提高了1.82倍。当培养基中铜含量超过10^-4mol／L时，培养细胞生长受到抑制或死亡。高浓度的钙使培养细胞结团现象严重。 在B₅培养基中添加L—抗坏血酸，悬浮培养的玫瑰茄细胞花青素产量下降。

关 键 词： 玫瑰茄 培养 筛选 中间产物 金属离子 抗坏血酸 蔗糖 花青素生产

分 类 号： [Q943.1]

领　　域： [生物学]