导　　师： 徐恒

学科专业： G1005

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 四川大学

摘　　要： 纤维素的分解方式主要有酸水解、氧化降解、微生物降解、热降解、机械降解、离子辐射降解等多种方式。其中纤维素的微生物降解是维持自然界碳循环的中心环节。近年来，已有多种细菌和真菌纤维素酶基因被克隆(目前已有40多种细菌纤维素酶基因被克隆[3，4])，并在大肠杆菌E.COLI或者其它受体菌中得到表达。厌氧纤维素分解菌的酶系与耗氧纤维素分解菌的酶系存在差异，具有特殊性，可以给纤维素生物转化带来新的材料和技术基础。使用纤维素酶的工业中许多工艺均附带一定的高温条件，嗜热纤维素酶将发挥极大应用潜能。从农业部沼气所获得多株高温严格厌氧纤维素分解细菌(邦系列极端嗜热厌氧纤维素分解菌)。通过随机扩增性多态DNA(RAPD)的方法来研究六株高温厌氧纤维素分解菌的遗传性多态，并构建其系统亲缘关系图。这些高温厌氧纤维素分解菌中纤维素分解能力最强，产酶活性最高、最稳定的厌氧纤维素分解菌是邦2菌。对邦2细菌进行16SRDNA的PCR扩增，序列测定，序列分析结果显示它与产乙醇热厌氧杆菌亚属(TAB.ETHANOLICUS_SUBGROUP)具有99.8％的相似性；邦2菌被鉴定为热厌氧纤维菌属(THERMOANAEROBACTER)。 　　本文以邦2菌为材料，制备其总DNA，经限制性核酸内切酶HINDⅢ部分酶切后，在T4DNA连接酶的作用下与经HINDⅢ完全酶切、去磷酸化的质粒载体PUC18连接，然后转化E.COLIJM109，建立了邦2的基因组文库，经筛选鉴定得到5278个重组子；经过七叶苷(ESCULIN)平板筛选法：约有0.26％黑色菌落产生；重组子经HINDⅢ酶切验证显示：重组质粒均含有外源DNA插入片段。结果表明已克隆到邦2菌纤维素酶系中的β-葡萄糖苷酶(GL)基因。提取重组质粒，通过HINDⅢ酶切分析，发现插入的外源DNA片段约为700BP左右。

关 键 词： 极端嗜热厌氧 纤维素分解菌 分子特征 葡萄糖苷酶 基因克隆 邦 菌

分 类 号： [Q936 Q814 X172]

领　　域： [生物学] [生物学] [环境科学与工程]