导　　师： 江青艳

学科专业： I0502

授予学位： 博士

作　　者： ;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： ghrelin与obestatin主要由胃分泌，是两种具有调节食欲和能量稳态等多种生物学作用的多肽。为研究猪ghrelin(pghrelin)与obestatin(pobestatin)对仔猪肝细胞与脂肪细胞生物学功能的调节作用，本论文开展了以下四个试验。 试验一pghrelin和pobestatin对仔猪原代肝细胞增殖与凋亡的影响。建立仔猪原代肝细胞无血清培养模型，用不同剂量pghrelin或pobestatin处理，以mtt法检测细胞增殖；选择100nm pghrelin或pobestatin单独处理及分别与[d-lys3]-ghrp-6、tyrphostin 23、pd98059和gf109203x共处理肝细胞48h，检测细胞增殖情况；此外，以不同剂量pghrelin或pobestatin处理肝细胞，检测与细胞凋亡相关酶caspase-3的活性。 试验二pghrelin和pobestatin对仔猪原代肝细胞分泌功能及其相关基因mrnas表达的影响。不同剂量pghrelin或pobestatin处理原代培养的仔猪肝细胞24h。收集培养上清液和肝细胞，测定上清液中总蛋白、白蛋白、甘油三酯、总胆固醇、alp、ast、alt、尿素氮、葡萄糖、igf-i、总胆汁酸、apo-ai、apo-b、hdl、igf-i、肝细胞总蛋白等指标。采用不同剂量pghrelin或pobestatin分别处理肝细胞，以rt-pcr方法检测肝细胞内参照基因13-actin、pghs-r1a、gpr39、lxrα、ppar-α、igf-i与torc2、pepck、hmgcoa、hsl、acc-α、fas、apo-ai与caspase-3等基因的mrna表达丰度。 试验三pghrelin和pobestatin对仔猪原代脂肪细胞增殖、分化与凋亡的影响。建立了原代脂肪细胞无血清培养模型，用不同剂量pghrelin或pobestatin处理脂肪细胞，于不同时段检测细胞增殖；选择100nm pghrelin或pobestatin单独处理及分别与[d-lys3]-ghrp-6、tyrphostin 23、pd98059和gfl09203x共处理背部或腹部皮下脂肪细胞48h，检测细胞增殖；以100nm pghrelin或pobestatin处理脂肪细胞，检测caspase-3的活性。 试验四pghrelin和pobestatin对仔猪原代脂肪细胞分泌功能及其相关基因mrnas表达的影响。采用100nm pghrelin或pobestatin分别处理仔猪背部与腹部皮下脂肪细胞。测定细胞内甘油三酯以及上清液中葡萄糖、leptin、甘油、caspase-3与脂肪细胞总蛋白等指标。采用100nm pghrelin或pobestatin分别处理脂肪细胞。24h后收集各组脂肪细胞， rt-pcr方法检测脂肪细胞内参照基因13-actin、pghs-r1a、gpr39、ppar-γ、ob、pepck、torc2、g-3-pdh、hsl、acc-α、fas、add1/srebp1、adiponectin、adfp/adipophilin、atgl、c/ebpα、lpl、caspase-3与sirt1等基因表达丰度。

关 键 词： 猪 离体肝细胞 脂肪细胞 生物学功能 调节作用 机理分析

分 类 号： [S811.2 S828.62]

领　　域： [农业科学] [农业科学] [农业科学] [农业科学]