导　　师： 何建国

学科专业： G0703

授予学位： 博士

作　　者： ;

机构地区： 中山大学

摘　　要： 本研究通过race-pcr技术将酚氧化酶原．1全长序列克隆出来，发现与已经报道的凡纳滨对虾的序列(命名为propo-1a)在3'utr上不同，而且在整个全长上也不同。我们克隆到的酚氧化酶原-1(命名为propo-1b)全长3232bp，长于propo—1a，2471bp。northern blot分析表明，一条清晰的约3.2kb的条带被检测到，而在2.5kb位置上则没有检测到。序列分析发现两个propo-1在3'utr上游均有一个微卫星序列，propo-1a的序列为完全型微卫星，propo-1b的序列为复杂的不完全型微卫星。两个序列在微卫星之间基本一致，而在其之后完全不同。我们检测了来自5个地方的不同凡纳滨对虾群体，发现没有检测到已经报道的propo-1a序列，均为我们报道的propo-1b序列。本文首次发现凡纳滨对虾中存在两种酚氧化酶原基因，也同时是在甲壳动物中首次发现同一物种存在两种酚氧化酶原基因。在ncbi的genbank中只有日本对虾有两种不同的酚氧化酶原蛋白序列，但从基因序列比对情况看，除了中间有一段序列不同，其它序列均一致。可以判断其应该是同一个基因编码的不同酚氧化酶原剪接体。而我们克隆的两个酚氧化酶原基因虽然在核酸、蛋白序列上有同源性，但它们在整体的cdna结构上不同，属于两个不同的基因，分别命名为酚氧化酶原-1b(lvpropo-1b)和酚氧化酶原-2(lvpropo-2)。lvpropo-1b和lvpropo-2有共同的功能结构域，包括铜离子结合位点a、铜离子结合位点b和thiol ester-like结构。蛋白序列比对表明它们之间有72％相似性。 凡纳滨对虾在wssv攻毒下，lvpropo-1b和lvpropo-2均呈现下调的现象，说明wssv会抑制lvpropo-1b和lvpropo-2在血细胞中的表达。 用pqe载体分别克隆和表达酚氧化酶原-1的一段多肽段和酚氧化酶原-2蛋白，并通过纯化，免疫小鼠，已经获得重组蛋白的抗体。经过west blotting分析，两个抗体均达到1：5000以上的抗体滴度。用对虾肝胰腺或其他组织浆液(血细胞除外)为样品做west blotting分析时，不能检测到预期位置条带。并发现血浆中不含酚氧化酶原，酚氧化酶原主要存在于血细胞中。利用间接免疫荧光分析技术，将酚氧化酶原-1b和酚氧化酶原-2定位于血细胞的细胞膜和细胞核上。

关 键 词： 对虾 先天性免疫 酚氧化酶原 白斑病综合症 微卫星 酚氧化酶原基因

分 类 号： [S945.46]

领　　域： [农业科学] [农业科学]