导　　师： 李加琪

学科专业： I0501

授予学位： 博士

作　　者： ;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： ctsd和ctsh基因分别编码溶酶体中典型的天冬氨酸蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶.作为溶酶体中活性最高的两种酶,在蛋白水平已经被证实存在猪品种间遗传差异,在猪肉的嫩度、风味以及加工品质中具有重要作用.2005年本课题组已经克隆获得猪ctsd基因全长cdna序列.猪ctsh基因也被定位在猪7号染色体上(7q12-q23或7q26),在该区域已经发现多个影响背膘厚、imf和眼肌面积的qtls.然而至今在猪中这两个基因的基因组序列及其结构特点,以及在中外猪种中的差异仍不清楚.因此本研究为进一步明确这两个基因与猪胴体与肉质等重要经济性状的关系,从获取基因序列入手,分析其序列变异、时空表达等特征.并通过本研究所建立的猪胎儿成纤维细胞系细胞转染实验,筛选有效干扰ctsd基因表达的sirna序列,为在体外细胞水平研究其功能奠定基础。主要研究结果如下: 1、利用比较基因组学和pcr方法,对猪ctsd和ctsh基因结构进行分析发现:猪ctsd基因全长9,064 bp,具有天冬氨酸蛋白酶家族基因9个外显子的保守结构;ctsh基因推测其具有半胱氨酸蛋白酶家族基因12个外显子的基因结构,并获得ctsh基因外显子3-12之间共16,515 bp dna序列. 2、采用不同品种pcr产物混合测序方法,对猪ctsd和ctsh基因进行snp筛查发现:在ctsd基因共发现35个snp位点,其中11个位于外显子,24个位于内含子,变异主要集中在内含子4和内含子5;在ctsh基因共发现50个snp位点,6个位于外显子,44个位于内含子. 3、采用pcr-rflp方法对两个基因在中外猪种(大花白、蓝塘、长白和杜洛克)群体中的基因型频率差异进行分析发现:ctsd基因3个snp位点在大花白、蓝塘、长白和杜洛克这4个中外猪种间,其基因型频率差异极显著.其中ctsd外显子9上8715a>g位点碱基突变导致neurod1转录因子结合位点发生变化,在发生突变时转录因子结合能力改变;对ctsh基因

关 键 词： 猪 基因 基因 基因克隆 序列变异 组织时空表达

领　　域： [农业科学] [农业科学]