导　　师： 王菊芳;邓毛程

学科专业： G10

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 华南理工大学

摘　　要： 嗜酸乳杆菌是一类可利用碳水化合物发酵而产生大量乳酸的细菌，此外可产生短链脂肪酸、抗菌肽、多糖、过氧化氢、特殊酶系等。一些农产品废弃物经过接种乳酸杆菌发酵后，其发酵产物对动物肠道健康十分有益，已有研究证明实质上起主要作用的是抗菌肽。由于嗜酸乳杆菌发酵过程中产抗菌小肽比较复杂，而目前酸值是唯一的量化指标，不能对该类饲料实际生产进行科学的指导。本研究的目的在对嗜酸乳杆菌生长及产酸规律研究的基础上，通过SDS-PAGE分析发酵温度和时间对该菌株产抗菌肽的影响，通过分子筛和阳离子层析分离纯化抗菌肽，并进行抗菌肽性质的研究。然后以各种农产品废弃物为底物进行发酵，优化发酵条件，使发酵终产物中抗菌肽含量大幅度提高，确定含抗菌肽饲料使用的最优化配比。
　　 本实验以本实验室保藏的嗜酸乳杆菌作为研究的对象，得到如下实验结果：
　　 1）嗜酸乳杆菌生长规律与代谢状况：嗜酸乳杆菌在液态培养条件下生长周期为72H，根据嗜酸乳杆菌的生长和产酸曲线可以选取培养到30～36左右的菌体进行后续操作。而嗜酸乳杆菌的抑菌特性实验通过以不同PH值的HCL做对照，对比金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的指示效果，确定了当PH为5．0时选枯草芽孢杆菌效果较明显，并可排除酸对抗菌肽抑菌效果的影响，也初步验证了以该嗜酸乳杆菌做产抗菌肽实验的可行性。
　　 2）抗菌肽的分离纯化：采用饱和硫酸铵法粗提抗菌肽，通过不同饱和度硫酸铵梯度实验，确定硫酸铵粗提的条件为饱和度60％。并研究了培养温度和时间对所产抗菌肽的影响，SDS-PAGE的结果表明：当温度为42℃时，10KD以下的蛋白质产量剧减，而培养时间并没有明显的变化，确定了培养温度和时间为37℃，30H。采用BIO-GEL（）P-6分子筛和CM离子交换层析柱，用SDS-PAGE鉴定，得到一条清晰的电泳条带，浓度为0．823MG/ML。
　　 3）抗菌肽其他性质的研究：进行热稳定性的研究，表明该抗菌肽属于按照热稳定性来分类中的第二类抗菌肽，能在100℃下加热20MIN保持较好的活性，但是在121℃时，抑菌活性受到较大影响。比较了五种不同的有机溶剂氯仿、甲醇、乙醇、正丁醇及异丙醇处理的效果，氯仿的效果最好。此外，还对抗菌肽做了蛋白酶敏感性的研究，结果表明：对木瓜蛋白酶、蛋白酶K以及胰蛋白酶敏感，而对中性蛋白酶和胃蛋白酶敏感性差。
　　 4）嗜酸乳杆菌固体发酵条件研究：嗜酸乳杆菌最合适的固态基质是豆粕，最佳的装料量为29，最佳的含水量为80％，最佳的起始PH为6．0，最佳的接种量为10％，而最佳的发酵温度为34℃。

关 键 词： 嗜酸乳杆菌 抗菌肽 饲料生产 农产品废弃物 固体发酵 发酵工艺

分 类 号： [S816.34]

领　　域： [农业科学] [农业科学] [农业科学]