导　　师： 谢辉

学科专业： I0401

授予学位： 博士

作　　者： ;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 香蕉穿孔线虫[RADOPHOLUS SIMILIS(COBB，1893)THORNE，1949]是一种毁灭性的迁移性内寄生植物病原线虫，是我国禁止进境一类检疫性植物有害生物，欧盟、美国等大多数国家都对其实施检疫。该线虫寄主范围广泛，已知寄主达360种以上，严重危害香蕉(MUSA SPP.)、柑橘(CITRUS SPP.)、胡椒(PRPER NIGRUM)、生姜(ZINGIBER OFFICINALE)和观赏植物等多种经济作物，是目前世界香蕉产量损失的主要原因之一。 组织蛋白酶B(CATHEPSIN B：EC3.4.22.1)属于溶酶体内半胱氨酸蛋白水解酶，广泛分布于寄生和自由生活线虫中。近年来研究表明，CATHEPSIN B在寄生虫卵的孵化、入侵寄主、对宿主致病和免疫逃避等生理生化过程中有极其重要的作用。因此CATHEPSIN B在控制寄生虫病方面有很重要的研究价值。目前关于植物寄生线虫组织蛋白酶的研究较少，而有关植物寄生线虫CATHEPSIN B的研究迄今未见报道。 本研究应用SMART技术构建香蕉穿孔线虫CDNA表达文库，分别对76条EST序列进行了BLAST分析，其中33条序列为UNIGENES。BLAST X分析表明：58％的序列与线虫类生物基因序列相似，其中2条序列与动物寄生线虫基因序列相似，17条序列与自由生活线虫基因序列相似；18％的ESTS序列与昆虫基因序列相似；9％的ESTS序列与细菌基因序列相似；6％的ESTS序列与真菌基因序列相似；9％的序列为新基因序列。 本文利用秀丽小杆线虫(CAENORHABDITIS ELEGANS)CATHEPSIN B基因为探针，通过反向NORTHERN BLOT杂交鉴定到香蕉穿孔线虫CATHEPSIN B基因序列，并应用SL法克隆到该基因CDNA序列全长为1257BP，该基因编码的蛋白质由1071个碱基编码356个氨基酸，分子量为41.4088024KD，将其命名为RS-CB-L。利用同源建模法对RS-CB-1编码蛋白的三维结构进行了预测。对RS-CB-1编码蛋白功能分析表明，该蛋白主要为细胞外分泌蛋白；亚细胞定位于�

关 键 词： 香蕉 穿孔线虫 组织蛋白酶 基因克隆 蛋白质 三维结构

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