导　　师： 江青艳

学科专业： I0502

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 该研究选择20日龄SD大鼠,分别取附睾脂肪垫及腹股沟皮下脂肪,经胶原酶Ⅰ消化后,分离纯化脂肪前体细胞进行离体培养,观察脂肪前体细胞分化过程中的形态变化.为了研究外源性物质对大鼠脂肪前体细胞增殖和分化的影响,分别在培养液中添加不同剂量的IGF-Ⅰ(25 NG/ML、50NG/ML、100NG/ML、200NG/ML)、GH(12NG/ML、24NG/ML、48NG/ML)和CLA(25μM、50μM、100μM、200μM),采用MTT法和油红O染色法检测大鼠脂肪前体细胞的增殖和分化情况;同时应用RT-PCR技术,检测了脂肪前体细胞分化过程中PPARγMRNA与C/EBPα MRNA的表达特点以及外源性IGF-Ⅰ、GH、CLA对细胞PPARγMRNA与C/EBPα MRNA表达量的影响.研究结果表明:1.采用胶原酶消化法可从大鼠附睾脂肪垫及腹股沟皮下脂肪分离出脂肪前体细胞;在含10%胎牛血清的DMEM/F12培养体系中,脂肪前体细胞聚脂分化为成熟脂肪细胞.2.大鼠附睾及皮下脂肪前体细胞的倍增时间分别为65.1H及68.8H;附睾脂肪前体细胞的增殖与分化能力明显高于皮下脂肪前体细胞.3.大鼠脂肪前体细胞在培养至第3D时PPARγMRNA表达量较低,至第5D显著增加2.5倍(P<0.05),此后至第9D一直维持较高水平.4.50~200 NG/ML外源性IGF-Ⅰ可显著促进大鼠附睾及皮下脂肪前体细胞的增殖与分化(P<0.05),且其促增殖作用呈明显的剂量依赖性.5.除12NG/ML外源性GH对大鼠附睾脂肪前体细胞有显著促分化作用外(P<0.05),24~48NG/ML的GH对大鼠附睾及皮下脂肪前体细胞的增殖与分化均无明显的促进作用.6.50~200μM外源性CLA均以剂量依赖性方式显著促进大鼠附睾及皮下脂肪前体细胞的增殖(P<0.05),25~100μM外源性CLA可显著促进大鼠附睾及皮下脂肪前体细胞的分化(P<0.05);100μM外源性CLA可显著提高离体大鼠脂肪前体细胞中PPARγ MRNA的表达量(P<0.05),但对C/EBPα MRNA的表达无显著影响(P>0.05).

关 键 词： 脂肪前体细胞 原代培养 分化调控 大鼠

分 类 号： [S852.2]

领　　域： [农业科学] [农业科学] [农业科学]