导　　师： 窦忠英

学科专业： I0603

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 西北农林科技大学

摘　　要： 该研究以山羊和WISTAR大鼠胎儿为材料,建立胎儿大脑皮层和脊髓组织显微解剖分离技术和NSCS无血清培养技术;另外,以SD大鼠胎儿为材料,进行了神经干细胞的冷冻解冻实验.对NSCS的分离方法、影响NSCS分离与增殖的因素和其特性进行了探讨,为进一步建立NSCS细胞系和临床应用奠定了基础.实验主要结果如下:1.利用显微解剖技术从6只胎龄为24~35 D(体尺为1.6~3.9 CM)的山羊胎儿中分离得到大脑皮层组织,制成单细胞悬液,用D-MEM/F12+10%NBS+10NG/ML EGF+10NG/ML BFGF+100IU/ML青霉素+100IU/ML链霉素作为培养液,4只得到原代GFPNSCS神经球样集落,应用机械法最高传至第3代.2.利用显微解剖技术从12只怀孕WISTAR大鼠得到128只胎龄为12~19D的胎儿分离得到脊髓组织,制成单细胞悬液,用D-MEM/F12+B27+20NG/ML EGF+20NG/ML BFGF+10NG/ML LIF+10NG/ML ITS+100IU/ML青霉素+100IU/ML链霉素作为培养液,有9只WISTER孕鼠得到RFSCNSCS,机械法结合0.125%胰蛋白酶消化法传代,最高传至6代.3.利用显微解剖技术从6只怀孕SD只大鼠得到69只胎龄为12~17D的胎儿分离得到脊髓组织,制成单细胞悬液,用D-MEM/F12+B27+20NG/ML EGF+20NG/ML BFGF+10NG/ML LIF+10NG/ML ITS+100 IU/ML青霉素+100IU/ML链霉素作为培养液,将处于对数生长期的RFSCNSCS机械法结合0.125%胰蛋白酶消化法制成单细胞悬液,以D-MEM/F12+20%NBS+10%DMSO作为冷冻保护液冷冻保存,解冻后进行培养、并鉴定其仍具有神经干细胞特性.4.所获得的GFPNSCS和RFSCNSCS经过形态学、单克隆实验、诱导分化实验和免疫组化染色分析,其结果证明具有NSCS诸多生物学特性.该次实验首次证明了山羊胎儿大脑中同样存在神经干细胞,并且成功地获得了RFSCNSCS,证实了其在冷冻保存后仍具有原有的特性,为进一步"移植脊髓损伤模型",实验奠定了基础.

关 键 词： 山羊 大鼠 胎儿 神经干细胞 培养 冷冻 鉴定

分 类 号： [S852.1 S827]

领　　域： [农业科学] [农业科学] [农业科学] [农业科学] [农业科学]