导　　师： 郑易之

学科专业： G1009

授予学位： 博士

作　　者： ;

机构地区： 东北师范大学

摘　　要： 我们从开花30~45D的大豆"白农6号"未成熟种子的CDNA中扩增出PM2全长基因序列,它可编码463个氨基酸的多肽.将该基因克隆至PET28A大肠杆菌表达载体后,转化至大肠杆菌BL21 STAR获得BL/PM2菌株.根据PM2蛋白的结构,我们还构建了PM2蛋白系列缺失克隆,即BL/PM2A(第1-262氨基酸序列)、BL/PM2B(129-262氨基酸序列,由6个重复的22-MER氨基酸序列组成)和BL/PM2C菌株(268个氨基酸,由12个重复的22-MER氨基酸序列组成).将构建的缺失克隆接种至高盐培养基上,检验它们所表达的多肽是否具有耐盐功能.结果表明,与对照BL/PET28菌株(含PET28A空载体)相比,表达PM2蛋白的BL/PM2菌株耐盐性(700MM NACL和700MM KCL)明显提高,而对1100MM山梨糖引起的渗透胁迫未显示出高的抗性.进一步比较缺失克隆在高盐培养基上的存活率,证明在700MM NACL和700MM KCL胁迫条件下,BL/PM2菌株的存活率高出对照BL/PET28菌株的1~2倍;缺失克隆BL/PM2A和BL/PM2B菌株的存活率与BL/PM2菌株接近;而BL/PM2C菌株的存活率为BL/PM2菌株和BL/PM2B菌株的2~3倍.上述实验结果表明,PM2蛋白和22-MER可提高大肠杆菌的耐盐功能,而且22-MER氨基酸序列表现出耐盐结构域的功能.为进一步研究PM2、PM2A、PM2B和PM2C基因表达的多肽是否在高等植物中具有耐盐功能,我们将上述核苷酸序列克隆至含CAMV 35S启动子控制的PBI121植物表达载体.并利用农杆菌介导法转化烟草.提取转基因烟草叶片的DNA进行PCR扩增分析,表明PM2、PM2A、PM2B和PM2C基因已经分别整合至转基因烟草的基因组DNA中.而且,通过测定植株叶片的叶绿素含量发现,转基因烟草的叶绿素含量明显高于对照烟草.这些结果表明转化PM2、PM2A、PM2B和PM2C基因的烟草植株的耐盐性均高于转化PBI121空载体的对照植株.

关 键 词： 大豆 抗旱耐盐性 基因 氨基酸序列 大肠杆菌 烟草

分 类 号： [S332.6 Q753]

领　　域： [农业科学] [农业科学] [生物学]