导　　师： 江昌俊

学科专业： I0203

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 安徽农业大学

摘　　要： 本论文中，首次从木本植物茶树中克隆出β-1，3-葡聚糖酶基因(GLU)的全长序列，并在原核表达系统中表达，鉴定表达蛋白的活性，为开展茶树抗真菌病害的基因工程研究及运用生物技术培养茶树良种打下基础。 本实验研究结果表明：1.根据已知茶树GLU 3’-端的部分序列设计特异引物，采用5'-RACE技术获得了5’-端核酸序列片段1005BP，经过测序，在GENBANK数据库中搜索分析表明，克隆所得碱基序列和所推导的氨基酸序列与已报道的其他植物的CDNA相应序列有很高的一致性，推测该特异产物为茶树GLU的片段。2.根据已知GLU 3’-端部分序列和克隆得到的5’-端序列设计特异引物，通过采用高保真酶体系做PCR反应，得到全长序列2002BP，开放阅读框为1488BP，编码495个氨基酸。在GENBANK和SWISS-PORT数据库中搜索分析表明，该序列所推导的氨基酸序列与已报道的其他植物GLU的CDNA相应序列有30～70﹪的一致性，推测该全长片段为茶树GLU。3.选用PET32A表达载体和BL21TRXB(DE3)宿主菌的原核表达系统，对GLU的开放阅读框片段进行表达。经IPTG诱导表达的融合蛋白的分子量约为73KDA，推算出GLU基因表达蛋白分子量为53.5KDA，与预计的分子量52.9KDA相符。表达的蛋白经薄层层析分析，但没有酶活性。

关 键 词： 茶树 葡聚糖酶 克隆 蛋白表达

分 类 号： [S571.1 Q786]

领　　域： [农业科学] [农业科学] [生物学]