导　　师： 庞义

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 中山大学

摘　　要： 苏云金芽孢杆菌(bacillus thuringiensis, bt)中一些类型杀虫晶体蛋白(insecticidal crystal proteins, icps)的结晶机制是依靠某些分子伴侣的帮助,而p19和orfl-orf2基因都是分子伴侣基因,但对它们能否提高icps的表达量及促进晶体形成,目前尚不能确定.该研究根据已知序列设计了多对引物,对本室保存的150株bt菌株进行 p19和orfl-orf2基因的pcr筛选,发现它们的存在具有一定广泛性.选择来自bt以色列亚种(bt subsp.israelensi, bti)的p19基因和本室土壤分离菌株y2的orfl-orf2基因,经多步克隆,构建了两个自带相应操纵子启动子序列和分子伴侣基因的bt表达载体php19及phy2p.利用以上载体构建了表达溶细胞蛋白的cyt2ba7基因和杀蚊蛋白的cry11aa基因的两个重组质粒系统.将各重组质粒经电激转入bt晶体缺陷型菌株4q7中进行表达,sds-page和western-blot检测发现php19能成功表达cry11aa蛋白,但未能表达cyt2ba7蛋白;而phy2p与php19则正好相反.同时发现两个分子伴侣基因都有助于提高cyt2ba7和cry11aa蛋白在缺失p19、只有p19或同时具备p19及orfl-orf2基因的情况下都能形成晶体,且三者的晶体大小相近.

关 键 词： 苏云金芽孢杆菌 杀虫晶体蛋白 分子伴侣基因 分子伴侣基因 基因 基因

分 类 号： [S482.39]

领　　域： [农业科学] [农业科学]