导　　师： 余祥勇

学科专业： I0801

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 广东海洋大学

摘　　要： dmrt基因家族是新发现的一个基因家族，该家族成员所编码的蛋白质都包含一个具有dna结合能力的保守基序，即dm结构域，以锌指结构与特异dna序列相结合，通过调节目的基因转录发挥作用，主要参与性别决定与分化、早期胚胎发育及器官形成。 sox基因是一类进化中高度保守的家族基因，它们的共同特点是都包含了一个高度保守的由79个氨基酸残基组成dna结合结构域，即hmg-box(high mobility groupbox)。sox基因作为一种转录调控因子，参与多种发育过程及性别分化的调控。 本研究采用普通pcr技术，克隆到马氏珠母贝3个dm结构域和1个hmg框，证明了dmrt基因和sox基因家族在马氏珠母贝中的存在。采用race-pcr的方法，克隆了马氏珠母贝的dmrt2基因、dmrt5基因和sox14基因的全长cdna序列。结果显示：马氏珠母贝的dmrt2基因cdna全长为100sbp，有一个836bp(75-910)的开放阅读框，编码278个氨基酸，它编码的氨基酸序列(22-435)与小鼠(mus musculus)的dmrt2基因(342-759)的一致性为54％，故命名为pmdmrt2。dmrt5基因的cdna全长为873bp，有一个621bp(127-747)的开放阅读框，编码206个氨基酸，所编码的氨基酸序列(46-186)与剑鱼(xiphophorus maculatus)的dmrt5(45-183)的一致性达91％，故命名为pmdmrt5。sox14基因的cdna全长为1631bp，有一个1008bp(144-1151)的开放阅读框，编码336个氨基酸，所编码的氨基酸序列(171-635)与赤拟谷盗(tribolium castaneum)的sox14基因(69-564)的一致性为56％，故命名为pm sox14。 采用rt-pcr技术对以上基因进行表达图谱分析，结果显示：马氏珠母贝的dmrt2基因在雄性性腺中特异表达，具体时序则是从雄性性腺发育早期开始表达，雄性成熟期表达量较多，雄性向雌性转化期表达量渐少，到雌性早期只有微量表达，最后到雌性成熟期不再表达，可初步判断马氏珠母贝dmrt2基因在性别决定与分化过程中起重要作用。马氏珠母贝的dmrt5基因在鳃、外套膜、闭壳肌、消化盲囊和雌性性腺中都有表达，但在雄性性腺中的表达量最高；在三月幼贝性腺、雄性向雌性转化期性腺、发育早期雌性性腺、成熟期雌性性腺都有表达，但在早期雄性性腺、成熟期雄性性腺中表达量较多。马氏珠母贝的sox14基因除在闭壳肌和雌性性腺中表达量较少外，在其他组织中的表达量相差无几；且在性腺发育各个时期都有表达，但在雌性早期和雌性成熟期表达量较少。 采用原位杂交技术确定dmrt2基因在性腺中的具体的定位信息，结果显示：马氏珠母贝的dmrt2基因只在精原细胞、精母细胞和精子细胞中表达，在精子中几乎没有表达，在各个时期卵子中均不表达。进一步证实马氏珠母贝的dmrt2基因在性别决定与分化过程中起重要作用。本研究证实，马氏珠母贝的dmrt2基因、dmrt5基因和sox14基因与其他动物的相应基因间存在高度的同源性，尤其是dm结构域和hmg框序列。其中，pmdmrt2基因参与马氏珠母贝性别决定与分化，pmdmrt5和pmsox14基因参与马氏珠母贝胚胎发育其他过程，是否也与性别决定和分化有关，有待于进一步的研究。

关 键 词： 基因 基因 性别决定 基因克隆 马氏珠母贝 时空表达

分 类 号： [S968.316.9 Q953.1]

领　　域： [农业科学] [农业科学] [生物学]