导　　师： 陈永福;安晓荣

学科专业： G1003

授予学位： 博士

作　　者： ;

机构地区： 中国农业大学

摘　　要： 本文研究了碱性成纤维细胞生长因子对myostatin基因表达的影响及机制。文章分为五个部分。 一、本文首次克隆到中国小尾寒羊18kda-bfgf基因的全编码序列，从分子特征与分子进化的角度进行了分析。 二、构建真核表达载体pcmv-neo-bfgf，转染c2c12细胞以及注射小鼠后腿肌肉，实现外源性bfgf基因在细胞和骨骼肌内表达，实时荧光定量pcr和western blot检测细胞和骨骼肌内源性myostatin基因的表达水平。 三、将小尾寒羊bfgf基因克隆进原核表达载体pet-28a，构建成原核表达载体pet-28a-bfgf，转化人肠杆菌bl21。在iptg的诱导下，实现了目标蛋白在大肠杆菌中的成功表达。 四、将本实验所获得的重组羊bfgf添加到细胞培养液中，或用3种信号通路抑制剂预处理细胞，以探讨bfgf对c2c12细胞的促生长作用及其作用机制。 五、本部分旨在初步探索bfgf与myostatin之间互作关系的调控机制。在pd98059和/或bfgf处理细胞后，实时荧光定量pcr检测细胞内源性myostatin的转录水平，western blot检测胞内erkl/2的磷酸化程度。

关 键 词： 成纤细胞 分子进化 基因表达

分 类 号： [Q253 Q786]

领　　域： [生物学] [生物学]