导　　师： 李文笙

学科专业： G1004

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 中山大学

摘　　要： 本文分析了ghrelin在各组织与胚胎发育各个阶段的表达情况，同时初步鉴定了它在中枢神经系统以及肝脏中的功能。 首先，本文利用rt—pcr以及real—time pcr分析了ghrelin表达情况。组织分布实验发现，gharelin仪在胃中单一性表达，但不同的区域其表达量存在较大差异。胃底部表达量最高，其次为胃体部，幽门以及贲门位置表达量低，推测ghrelin合成细胞主要集中于胃底部和胃体部。胚胎发育期间，从多细胞期开始，伴随整个胚胎发育阶段，直到仔鱼孵化出膜，均可检测ghrelin的表达。推测ghrelin在胚胎发育过程中发挥重要功能。心脏形成期，ghrelin的表达出现最高水平，是心脏形成前期的6-20倍。这一时期也是内脏形成期，胃脏开始出现，推测负责ghrelin合成的x/a细胞在这一时期开始分化形成。 同时，我们化学合成了斜带石斑鱼ghelin以及无ser3辛酰化修饰的des—acylghrelin蛋白，采用喷涂法拌入常规饵料中，对鱼龄八个月的石斑鱼进行长期投喂实验。42天投喂后，无论ghrelin还是des—acyl ghrelin实验组，体重和体长方面均没有明显的上升或是下降。全鱼营养指标方面也没有显著的变化，包括水分含量、粗蛋白含量、粗脂肪含量以及肝体比。糖原含量方面，ghrelin与des—acyl ghrelin均明显上调肝脏糖原含量，同时des—acyl ghrelin还能下调肌糖原含量。 连续20天饥饿，石斑鱼脑区参与摄食调控的npy与cpt1a基因表达水平均有显著升高，但胃组织中ghrlein表达量并没有明显变化。同时，连续投喂含有ghrelin或者des—acyl ghrelin的饵料6周后，npy与cpt1a表达维持基础水平，与对照组没有显著差异。也就是说，无论饥饿还是长期投喂，在mrna表达水平上，ghrelin与摄食之间并没有相关性。因此，我们推测，ghrelin并非石斑鱼摄食行为的唯一“启动因子”，应该存在除ghrelin/ghsr1a系统以外的其它的补偿途径，参与石斑鱼食欲调节。此外，我们还研究了ghrelin、des—acyl ghrelin在生长调节中的功能。连续投喂6周，ghrelin与des—acyl ghrelin对ghrh、gh表达水平均没有明显影响。以上结果表明，无论饥饿或者长期投喂，石斑鱼ghrelin以及des—acyl ghrelin在中枢神经系统中均没有明显功能。 最后，我们考察了ghrelin与des—acyl ghrelin在肝脏糖脂代谢中的功能。连续投喂6周后，利用real—time pcr检测肝脏糖脂代谢相关基因表达水平。发现ghrelin与des—acyl ghrelin促进脂肪酸合成抑制脂肪酸分解。负责脂肪酸合成的乙酰辅酶a羧化酶(acc，acetyl—coacarboxylase)与脂肪酸合成酶(fas，fatty—acid synthase)表达丰度均有升高，而脂肪酸分解限速酶a型肉毒碱棕榈酰转移酶1(cpt1a carnitine palmitoyltransferase1a)表达受到抑制。糖代谢中，ghrelin下调糖质新生限速酶葡萄糖6磷酸酶(g6pase，glucose6-phosphatase)表达，des—acyl ghrelin没有明显作用。此外，我们还研究了溶酶体增殖剂激活受体(ppars，peroxisome proliferator—activated receptors)表达丰度，结果显示pparα1、pparα2以及ppar()表达量均没有明显变化。以上结果表明，ghrelin能够促进能量正平衡，促进脂肪酸合成抑制脂肪酸分解，同时抑制糖脂新生。同时，ghrelin与des—acyl ghrelin的肝脏代谢功能可能并非通过ppars介导。

关 键 词： 斜带石斑鱼 酰基化修饰 基因序列 胚胎发育 表达 活性多肽

分 类 号： [Q959.4]

领　　域： [生物学]