导　　师： 庞义

学科专业： G1005

授予学位： 博士

作　　者： ;

机构地区： 中山大学

摘　　要： 苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus，acmnpv) ac53基因是杆状病毒基因组中的一个高度保守但功能未知的基因。本文对该基因的转录、表达以及亚细胞定位进行了系统的研究；同时利用et—同源重组系统和bac—to—bac系统，构建了ac53缺失型重组病毒，研究了ac53在病毒复制中所起的重要作用；在ac53缺失的基础上，利用定点突变技术，相继构建出6株ac53点突变补回型重组病毒，对ac53的功能进行了深入的研究。 ac53基因位于acmnpv基因组44，712 nt～45，131 nt之间，全长420 bp，编码140个氨基酸，预计编码蛋白的分子量为16.994 kda。在ac53起始密码子atg的上游存在三个典型的杆状病毒晚期启动子元件taag。序列分析表明，ac53的氨基酸序列在杆状病毒中具有高度的保守性，与plxymnpv、romnpv、bmnpv、mvmnpv的同源蛋白的相似性超过了90％。氨基酸序列的同源比对分析结果显示，ac53中存在一个潜在的锌指环蛋白模序。 5'—race结果表明ac53有两个转录起始位点，分别位于其atg上游-15 nt～-12 nt和—45 nt～—42 nt的杆状病毒典型晚期启动子模序taag中的第二个碱基a。pcr扩增得到ac53全长读码框序列，将其克隆到原核表达载体pqe30上，在大肠杆菌中表达出分子量约为17 kda的融合了六个组氨酸的his—ac53融合蛋白。以纯化的his—ac53融合蛋白为抗原，免疫新西兰大白兔，制备了ac53抗血清。免疫印迹分析表明，该抗血清能与感染acmnpv的细胞总蛋白样品发生特异性反应。可检测到大小约为20 kda的ac53蛋白(比预期的16.994 kda分子量大，推测可能是由于该蛋白发生了某些翻译后修饰所致)，且能在感染后(post—infection，p.i.)24 h被检测出来，并一直持续到72 h p.i.。这些结果均表明ac53可能是一个晚期基因。 为了研究ac53在宿主细胞中的定位情况，我们构

关 键 词： 杆状病毒 基因敲除 基因转录 基因表达

领　　域： [生物学]