作　　者： ; ; ; ; ; ;

机构地区： 福建农林大学园林学院

出　　处： 《福建林学院学报》 2011年第2期126-130,共5页

摘　　要： 以西洋杜鹃(Rhododendron hybridum)叶片提取的基因组DNA为材料,用引物UBC880(序列为GGA GAG GAG AGGAGA)研究了PCR反应体系的主要成分及退火温度对该种植物ISSR扩增结果的影响。确立了可用于西洋杜鹃ISSR-PCR分析的最适宜的PCR反应体系:20μL PCR反应体积中,含10 ng模板DNA,0.25 mmol.L-1 dNTPs,2.0 mmol.L-1 Mg2+,1.0U Taq DNA聚合酶,0.4μmol.L-1引物,并确定引物UBC 880的最适退火温度为54.4℃。PCR扩增程序:94℃预变性5 min,94℃变性45 s,54.4℃退火45 s,72℃延伸1.5 min,共40个循环后,72℃延伸7 min,4℃保存。应用该ISSR体系对11份西洋杜鹃种质进行了扩增,证实了该体系的适用性和稳定性。 Taking the genomic DNA of Rhododendron hybridum leaves as the experimental materials,the concentrations of PCR components and the annealing temperatures,which affect the inter-simple sequences（ISSR） amplification,were optimized with the primer UBC880（primer sequence： GGA GAG GAG AGG AGA）.The suitable ISSR-PCR system for R.hybridum was as follows： the 20 μL PCR volume includes 10 ng DNA templates,0.25 mmol · L-1 dNTPs,2.0 mmol · L-1 Mg2＋,1.0 U Taq DNA polymerase and 0.4 μmol · L-1 primers.The optimal PCR process was 5 minutes at 94 ℃ for predenaturation,the follows by 40 cycles,each with 45 seconds at 94 ℃ for denaturation,45 seconds at 54.4 ℃ for annealing,1.5 minutes at 72 ℃ for extension,finally 7 minutes at 72 ℃ for extension and holding the samples at 4 ℃.The ISSR-PCR of 11 cultivars of R.hybridum approves the suitability and stability of the system.

关 键 词： 西洋杜鹃 简单序列重复区间 反应体系 优化

领　　域： [农业科学] [农业科学]