作　　者： ; ; ; ; ;

机构地区： 汕头大学医学院

出　　处： 《汕头大学医学院学报》 2010年第2期84-88,共5页

摘　　要： 目的:分析载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白质3F和3G(APOBEC3F/3G)的蛋白基序,获得具有细胞转导潜力的抗病毒基序融合蛋白。方法:用MotifScan软件对APOBEC3F/3G进行生物信息学分析,找出APOBEC3F/3G中的锌结合域(ZBRs)。通过PCR及多步酶切克隆得到APOBEC3F/3G的3个串联ZBRs基因片段,并将其与人免疫缺陷病毒(HIV)的TAT蛋白转导域基因克隆至原核表达载体(pET32a),转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达。结果:酶切和测序鉴定,得到含有HIV-TAT和3个ZBRs基因的重组质粒;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测分析,融合蛋白在BL21(DE3)中获得表达,占菌体总蛋白的20%。结论:获得含HIV-TAT和3个ZBRs的融合表达重组蛋白,为进一步研究APOBEC3F/3G抗病毒机制,也为其在抗病毒治疗中的应用打下基础。 Objective：To analyze the activity domains of apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic-polypeptide（APOBEC）3F/3G,and to obtain the fusion protein of HIV TAT protein transduction peptide（HIV-TAT）and APOBEC zincbinding region（ZBRs）.Methods：The APOBEC3F/3G were analyzed using MotifScan software.ZBR domains were found and cloned by PCR and Multi-step enzyme cloning.The three series fregments of ZBRs and HIV-TAT were inserted into pET32a.The recombinant plasmids were transformed into BL21（DE3）and induced by isopropyi-β-D-thiogalactopyranoside.Results：The recombinant plasmid was identified using DNA sequencing.The expression of fusion protein of HIVTAT and APOBEC ZBRs was detected up to 20% of total bacterial proteins from induced E.coli using sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis and gray-scale scanning.Conclusion：The fusion protein of HIV-TAT and APOBEC ZBRs is obtained,it＇s helpful for further antiviral mechanisms research and application of APOBECs.

关 键 词： 载脂蛋白 编辑酶催化多肽样蛋白质 锌结合域 蛋白转导

领　　域： [经济管理] [生物学]