作　　者： ; ; ; ; ; ; ; ; ;

机构地区： 深圳出入境检验检疫局

出　　处： 《动物医学进展》 2010年第2期25-31,共7页

摘　　要： 分别设计和合成4对特异性引物,通过对反应条件的优化,初步建立了鉴别蓝舌病病毒(BTV)、鹿流行性出血病病毒(EHDV)、水疱性口炎病毒(VSV)和赤羽病病毒(AKV)的多重RT-PCR检测方法,并对其特异性和敏感性进行了检测。结果表明,所设计的4对引物可对同一样品中的VSV、BTV、EHDV和AKV进行特异性扩增,所扩增的目的片段的长度分别为301、351、537、250bp。建立的四重RT-PCR检测方法能够检测出10-7稀释的细胞培养病毒液,4种病毒之间没有发生交叉反应,说明该检测方法特异性强,敏感性较高。所建立的多重RT-PCR方法可用于上述4种动物虫媒病病毒的快速鉴别诊断,在动物检疫、临床诊断和流行病学调查方面具有较好的应用前景。 Single-tube multiplex reverse transcription-polymerase chain reaction （mRT-PCR） assay was developed to detect and identify arboviruses in infected cell-culture fluids and field specimens. The four viruses are Bluetongue viruses（BTV）,Epizootic hemorrhagic disease viruses （EHDV）,Vesicular stomatitis virus （VSV） and the Akabane virus（AKV）. Four sets of specific primers were chosen from VP7 gene of BTV, VP7 gene of EHDV,N gene of VSV and N gene of AKV, and used in one mRT PCR reaction. The PCR conditions were optimized. The mRT-PCR readily identified viruses by discriminating the size of their specific amplified gene products such as 351 bp for BTV, 537 bp for EHDV, 301 bp for VSV and 250 bp for AKV. The technique was equally sensitive for detecting four different viruses in cell cultures. The mRT-PCR reliably detected 10^-7 median tissue culture viruses. The mRT-PCR may be a sensitive and rapid assay for surveillance of four arboviruses in field specimens.

关 键 词： 蓝舌病病毒 鹿流行性出血病病毒 水疱性口炎病毒 赤羽病病毒 多重

领　　域： [农业科学] [农业科学] [农业科学] [农业科学] [农业科学] [农业科学]