作　　者： ; ; ; ; ;

机构地区： 华南农业大学动物科学学院

出　　处： 《华南农业大学学报》 2004年第3期105-108,共4页

摘　　要： 为了获得高效分泌表达ChIFNγ的重组毕赤酵母菌株,利用基因工程技术,将435 bp的ChIFNγ成熟肽编码基因亚克隆到巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris表达载体PPICZαC中,将该重组质粒用BstX Ⅰ线性化并通过电击法转化毕赤酵母X-33菌株,用500 μ/mL抗生素Zeocin筛选高拷贝阳性重组菌.甲醇诱导表达的重组ChIFNγ经SDS-PAGE电泳,可在相对分子质量约2.0×104处检测到目的蛋白带,目的蛋白占酵母表达上清液总蛋白质的35％.微量细胞病变抑制法检测表达产物的生物学活性,检测结果表明,巴斯德毕赤酵母表达的重组ChIFNγ的抗病毒效价为6 400 U/mL. The 435 bp chicken interferon-7 gene cDNA encoding mature peptide was cloned into the vector pPICZαC, the recombinant vector linearized by BstX I and transformed into Pichia pastoris X-33. After the PCR analysis of the Pichia transformants, ChIFNγ gene was expressed in Pichia pastoris . SDS-PAGE analysis of the culture supernatants showed that ChIFNγ gene could be expressed as a 2.0 ×104 protein. Density scanning of the SDS-PAGE revealed that the targeted protein accounted for 35% of the total protein in the supernatants. The titer of the antiviral activity in culture supernatant of Pichia pastoris was about 6 400 U/mL.

关 键 词： 鸡 干扰素基因 毕赤酵母 基因表达 抗病毒活性

领　　域： [农业科学] [农业科学] [农业科学] [生物学]